ELISA实验注意事项

一、实验前准备

1. 试剂检查与配制

①试剂检查：实验前务必对试剂盒进行仔细检查，包括生产日期、批号、有效期等，确保试剂盒在有效期内使用。

②试剂配制：严格按照试剂盒说明书进行试剂配制，包括抗体、酶标抗体、底物等，避免出现浓度误差或污染。配制好的试剂应存放于4℃冰箱中，并尽快使用，避免反复冻融。

2. 实验器材准备

①移液枪：保证移液枪的准确性，误差不能超过2%。可用水和电子天平进行确定，但最好有专业人员进行矫正。

②枪头：要配备20ul、50ul、100ul、1000ul和排枪各一支。吸取不同的液体后，要更换枪头，即使是吸取标准品时也要更换，以避免交叉污染。

3. 试剂盒及样本处理

①试剂盒取出：在实验前1小时将试剂盒从冰箱中取出，使各种试剂都恢复到室温，以使结果更稳定。

②样本处理：待检样品要澄清，避免浑浊或悬浮物影响实验结果。对于细胞培养上清、血清、血浆等样本，需要按照规定的方法进行收集和保存，确保样本的新鲜度和活 性。

二、实验过程注意事项

1. 液体吸取与加样

速度控制：用枪吸取液体时速度不能太快，以免产生气泡而使吸取量不准确。

量程选择：吸取液体时，要用量程和需要量接近的枪去吸，以减少误差。

加样操作：将液体加到酶标孔中时，避免枪头和孔内液体接触，可使枪头上的液滴和孔壁接触，液滴会自然流下去。

2. 孵育与温浴

孵育条件：震荡孵育可以加快抗原抗体之间的相互接触，使反应更加充分。水浴温度应保持在37℃，且水浴需要封闭以防止污染。

温浴时间：温浴时间应严格遵守试剂盒规定，以确保反应充分进行。

3. 洗板与显色

洗板操作：洗板时，每次洗液加入后，应静置1-2分钟，使清洗更加彻底。没有洗板机时，倒去液体后，要将酶标板在报纸或毛纸上用力拍干。

显色控制：显色需控制好时间，根据说明书操作。时间过短会导致结果偏低，时间过长则可能导致空白增高或非特异性显色增加。

4. 底物与终止液

底物配制：底物是光敏感的，要在临用前现配，避免长时间光照导致失效。

毒性防护：底物有一定的毒性，终止液对皮肤有腐蚀性，应尽量避免接触。

三、实验后处理与数据分析

1. 酶标仪使用

①预热：检测前，要打开酶标仪，使之稳定10分钟以上，以获得更稳定的结果。

②波长选择：在读数过程中，应选择适宜的波长和时间进行检测，并使用配套的仪器设备进行数据分析。

2. 数据处理与验证

①双孔实验：应尽量做双孔实验，以保证数据的准确性。

②结果验证：对结果有疑问的样品要用其它方法进行确证，以确保结果的可靠性。

四、总结

ELISA实验过程复杂且对条件要求严格，因此在进行实验时需要注意多个方面。从实验前的试剂检查、器材准备到实验过程中的液体吸取、孵育、洗板、显色等环节，都需要严格遵守操作规程和注意事项。只有这样，才能确保实验结果的准确性和可靠性，为科学研究和临床应用提供有力的支持。