southern blot实验流程

  Southern blot实验流程如下：

  1. DNA样品制备：从组织或细胞中提取总DNA，并用约束酶进行消化。将消化的DNA样品用琼脂糖凝胶电泳进行切割和分离。

  2. 转移DNA片段到固体载体：利用盖伯色图设备，将琼脂糖凝胶浸泡在碱性缓冲液中，随后通过间隙吸附作用使DNA片段与硝酸纤维素或尼龙膜支持膜发生相互作用转移到支持膜上，形成单层支持膜。

  3. DNA固定：将支持膜暴露在紫外线下或使用热交联法将DNA固定在支持膜表面，以防止DNA折叠甚至剪断。

  4. 核酸探针制备：根据关注的特定DNA序列设计核酸探针，标记探针通常使用放射性同位素或非放射性分子进行。

  5. 杂交：将标记好的核酸探针加入到支持膜上，与被检测的DNA特定序列杂交，在相结合的区域形成稳定复合物，非特异性结合则可通过洗涤去除。

  6. 洗涤和显像：对已经杂交完毕的支持膜进行高温，严格高盐甚至碱性条件下的洗涤，以使非特异性DNA探针与样品DNA分离并去除。随后将X光片或显影膜暴露在核酸探针的标记物下，进行检测、计数和绘制。