牙周膜细胞和牙髓细胞的培养方法

牙髓细胞的培养

1、  培养用液：

PBSA ；

胶原酶： I 型，用 D － Hank’s 液配制， 625U/ml ；

培养液： DMEM ＋ 10 ％ FBS ；

2、  Protocol ：

u       取拔除的正畸牙或阻生牙（年龄小者较佳），尽量完整的取出牙髓，置于培养皿中，用 PBS 冲洗；

u       将牙髓放入离心管，加入胶原酶 2 － 3ml/ 牙， 37 ℃ ， 2 － 3 小时（原则是将牙髓消化彻底 ）；

u       加入等量培养液，吹打至单细胞，离心，重悬，接种，牙 /6well ；

牙周细胞的培养

1、  培养用液：

PBSA ；

胶原酶： I 型，用 D － Hank’s 液配制， 625U/ml ；

培养液： DMEM ＋ 10 ％ FBS ；

2、  Protocol ：

u       取拔除的正畸牙或阻生牙（年龄小者较佳），置于培养皿中，用手术刀仔细刮除附着在牙根上的牙龈组织，然后用 PBS 反复冲洗，以去除残余组织以及牙根表面的血细胞；

u       将牙放入离心管，加入胶原酶 2 － 3ml/ 牙， 37 ℃ ， 1 小时；

u       加入等量培养液，仔细吹打牙根表面，收集细胞，离心，重悬，接种，牙 /6well ；

* 培养获得的细胞是牙周膜细胞和成牙骨质细胞的混合体 !

PS ：

u       年龄对细胞产量以及活力影响较大，最好选用年龄在 10 － 14 岁之间的正畸牙或阻生牙；

u       如果选用大鼠牙齿作为培养目标，培养液应稍作调整，基本原则是抑制细胞的衰老，具体做法是：适当降低血清浓度（选用进口血清最佳 ），如果降低血清浓度后，细胞增殖减慢，可加入促进细胞增殖的因子（例如 BPE 25ug/ml 等 ）。