细胞划痕实验操作详细步骤

一、细胞划痕实验Culture Insert方法操作步骤

1、准备细胞，培养液，culture lnsert。

2、如图，将细胞接种于Dish中间的Insert，细胞长满Insert区域后用镊子移除Insert即可产生500μm宽度的划痕。

3、每隔4-6小时拍照记录。

4、根据收集图片数据分析实验结果。

二、常规细胞划痕法操作步骤

实验器材：细胞培养板、marker笔、直尺、微升枪头、培养基、PBS

1、培养板划线

首先使用marker笔在6孔板背后，用直尺比着，均匀的划横线，大约每隔0.5~1cm一道，横穿过孔。每孔至少穿过5条线。划线时注意线不要太粗。

2、铺细胞

在孔中加入约5×105个细胞（不同的细胞数量有所不同，根据细胞的生长快慢调整），接种原则为过夜后融合率达到100%。

3、细胞划线

第二天用枪头或者无菌牙签，垂直与细胞平面，沿着头一天划在平板背面的线在细胞层上进行划痕(不同孔之间最好使用同一只枪头或牙签)。

4、洗细胞

划痕完成后，使用无菌PBS洗细胞3次，洗去不贴壁的细胞，即划线时划线的细胞，是划线后留下的间隙清晰可见，然后更换新鲜无血清培养基。

5、细胞培养、观察

将细胞放入37℃5%CO2培养箱，培养。然后在适当的时间点，如0，6，12，24h取出细胞，显微镜线观察并测量划痕的宽度，并拍照(具体时间依实验需要而定)。

6、结果分析

使用Image J软件打开图片后，随机划取6至8条水平线，计算细胞间距离的均值。

注意：保持实验环境的无菌性；选择适当的细胞贴壁；采用无血清培养液