彗星实验操作常见问题答疑

问题一：彗星玻片可以重复使用吗?

答：不能。彗星玻片表面经过了特殊处理，一旦整个玻片经历了变性，电泳和洗涤的操作步骤，就不能再重复使用了。

问题二：可以用常规载玻片代替试剂盒中的彗星玻片吗？

答：不能，彗星玻片经过化学预处理，以增加附着力。如果采用常规载玻片的话，您的细胞/琼脂糖液滴将无法停留在载玻片上。

问题三：彗星玻片有多厚？

答：1.0mm（底层厚度，不包含蓝色层）

问题四：样本染料染色后，玻片可以保存多久？

答：玻片可在4℃的黑暗环境中保存3个月，荧光也不褪色。干燥且低温储存的载玻片可以保存一年。

问题五：说明书中配置电泳液的过程中没有提到是否需要灭菌？

答：不需要灭菌。如果配置的过程中发现有不溶物，可以进行过滤处理。

问题六：什么是好的阳性对照？

答：用20uM依托泊苷培养细胞4小时，作为彗星实验的阳性对照。

问题七：是否有化合物诱导DNA损伤的彗星分析数据供参考呢？

答：与ELISA不同，彗星实验不提供对照，因为任何彗星实验结果都将根据实验条件的不同而变化。例如，如果电泳条件不同，则包含相同数量DNA损伤的细胞的尾巴大小可能会不同。所以，与我们的结果或其他研究人员的结果进行比较将毫无意义，因为两者之间的条件永远不会相同。如果您有兴趣测试化合物对DNA损伤的影响，建议保持所有实验条件一致，并使用相同的运行时间和软件进行分析。

问题八：如何防止琼脂糖凝胶从载玻片上脱落？

答：彗星玻片经过化学处理，表面带有粘性，可吸附琼脂糖。琼脂糖从玻片上脱落，主要是因为琼脂糖-细胞混合液添加到玻片孔上时，未完全覆盖。必须保证琼脂糖凝胶完全覆盖在孔上，另外玻片始终保持水平状态也很重要。