红细胞裂解液的配制

红细胞裂解液（Tris-NH4Cl）：称取3.735g氯化铵、三羟甲基氨基甲烷（Tris）1.3g加水溶解并稀释至500ml。0.22μm滤膜过滤除菌，4℃保存。细胞悬液加红细胞裂解液后，混匀静止4-5分钟，待红细胞完全破碎，1000r/min离心5分钟，弃上清去除红细胞，得到白细胞沉淀。 结果第一次用的时候，觉得还可以，第二次和第三次用的时候离心后发现有絮状物质，不能很好的沉淀出白细胞。

（一）1　试剂配制　　 原液1号：10 g葡萄糖+0.6 g磷酸二氢钾+3.58 g磷酸氢二钠（7H2O）+20 ml 5 g/L酚红溶液，加双蒸水定容至1 000 ml。

原液2号：1.86 g氯化钙（2H2O）+4.0 g氯化钾+80 g氯化钠+1.04 g氯化镁+2.0 g硫酸镁（7H2O），加双蒸水定容至1 000 ml。

应用液有3种，1#：10 ml原液1号+10 ml原液2号，加双蒸水定容至100 ml。

2#：20 ml原液1号+20 ml原液2号，加双蒸水定容至100 ml。 3#：1 ml原液1号+1 ml原液2号，加双蒸水定容至100 ml。

2　红细胞裂解　 取100 μl抗凝全血，加2 ml应用液3#，混匀15～20 s；加2 ml应用液2#，混匀15～20 s；加4 ml应用液1#，混匀15～20 s；300×g离心2 min，弃上清；收集沉淀，加PBS缓冲液，制成白细胞悬液，备用。 （这种红细胞裂解法满足了白细胞流式细胞仪检测分选要求，价格低廉，是一种简便快捷、经济实用的白细胞纯化分选方法。

1 红细胞裂解液(0.01mol/L Tris-HCL pH7.6; 0.01mol/L NaCl; 0.005mol/L MgCl2)

2 红细胞裂解液（139.6 mmol/L NH4Cl, 16.96 mmol/L Tris, 用1 mol/L HCl调 pH至7.2）

3 红细胞裂解液的制备：碳酸氢钾（KHCO3）1.0g；氯化氨（NH4CL）8.3g；EDTA-Na2 0.037g，加双蒸水至1000ml，即工作液。