肾小球分离与移植培养

SD 大鼠颈椎脱臼法处死， 75% 乙醇浸泡 1 ～ 2 分钟， 2 次，置超净台内，打开腹腔取出肾脏剪碎，置含 Hank ’ s 液的无菌培养皿洗涤，置 80 目不锈钢筛网上。用扁平自制小铲轻轻碾磨产物微小组织透过筛网，滤过组织 Hank ’ s 液混合物用吸管吸至 120 目不锈钢筛网，滤过，去小组织块，滤过物吸至 200 目不锈钢筛网，轻轻滤过， Hank ’ s 液洗涤 1 次，收集网上肾小球，镜下观察为分离良好的肾小球。肾小球用 0.2% 胰酶、 0.1% 胶原酶， 37 ℃消化 20 分钟，加血清终止胰酶反应，离心除去胶原酶。处理过的肾小球计数后接种至 24 孔培养板或 25ml 培养瓶，使肾小球大于 60 个 /cm2 ，加培养基 5 ～ 10ml （培养基组成： F12 — 3T3 上清 1 ： 1 ； 5% 马血清； 2.5% 胎牛血清；胰岛素 5 μ g/ml ； 25ng/ml 氢化可的松； 5 μ g/ml 转铁蛋白； 25ng/ml 前列腺素 E1 ；甲状腺素 0.02ng/ml ； D- 缬氨酸 150ng/ml ）肾小球培养 8 ～ 10 天，去除肾小球未生长组分，细胞继续培养 24 小时，形态学观察：细胞生长成单层多角型细胞，直径约 100 μ m 。