细胞内糖类染色方法—过碘酸席夫反应法

基本原理

过碘酸是一种强氧化剂，过碘酸的氧化作用先使糖分子的乙二醇基变为乙二醛基，乙二醛基继而与Schiff试剂结合，Schiff试剂本为无色亚硫酸品红复合物，但它与乙二醛基结合后形成紫红色反应物。颜色反应的深浅取决于组织内多糖（包括糖原、黏多糖、黏蛋白、糖蛋白、糖脂等）的乙二醇分子的多寡。

试剂

1. 席夫试剂的制备

① 称取0.5g碱性品红加入100ml沸水中，不断搅拌下煮5min，使其充分溶解；

② 待溶液冷却至50℃时过滤，加入浓度为1mol/L的HCl 10ml；

③ 当溶液冷却至25℃时再加入0.5g偏重亚硫酸钠，在室温下放置24h，其颜色呈褐色或淡黄色；

④ 再将0.5g活性炭加入呈色液中振摇1min后过滤，滤液为无色；

⑤ 将滤液置于棕色瓶内于4℃密封保存，一般可保存数月；

2. 卡诺固定液配制

将30ml氯仿和10ml苯乙酸加入60ml纯乙醇中即得；

3. 甲醛钙固定液配制

甲醛10ml和1g CaCl2 混合加水定容至100ml即得。

染色步骤

1. 用Hanks液将盖玻片漂洗3次；

2. 用卡诺（Carnoy）固定液或甲醛钙固定液固定5—10min；

3. 加入0.5%过碘酸作用10—15min；

4. 用蒸馏水漂洗1—2min；

5. 移入席夫试剂中作用15—30min，盖片样品稍稍变红；

6. 用自来水漂洗5—10min，盖片样品变红；

7. 用蒸馏水反复冲洗；

8. 用50%、70%、80%、90%、95%、100%的梯度乙醇逐级脱水各2min；

9. 用二甲苯透明，用光学树脂封片后观察；

结果

细胞含糖区呈紫红色。细胞核呈粉红色至紫红色，胞质无色。