弹性蛋白的分离

弹性蛋白的溶解性极差，一般采取的技术路线是使用多种手段将非弹性蛋白去除，以获得不溶性的弹性蛋白。 操作方法： 1．  将富含弹性蛋白的组织（如器官、胸膜、主动脉等）上附着的结缔组织仔细去除。 2．  用打碎机将组织在4℃、50%吡啶水溶液中打碎，3,000g×10min离心，弃上清，取沉淀。 3．  沉淀用冷 蒸馏 水离心洗涤，直至细胞无吡啶气味为止。 4．  真空干燥后，浸入液氮中，稍后取出研磨成粉，将其悬浮于2mol/L CaCl 2 溶液中，4℃持续搅拌24h。 5．  离心弃上清，沉淀用冷 蒸馏 水离心洗涤，无水乙醇作用20min，2 # 砂芯漏斗滤去抽提液，沉淀2:1（V/V）氯仿­­­-甲醇浸泡20min，再经2 # 砂芯漏斗滤去抽提液。沉淀用乙醚冲洗后，冷冻干燥。 6． 冷冻干燥后的沉淀，用胶原酶消化液悬浮，加入纯化的胶原酶（组织:酶＝50:1W/W），37℃，消化过夜。 7．  离心弃上清，沉淀重复6、7步骤，离心得到的沉淀用冷蒸馏水洗涤。 8．  将沉淀移入具塞玻璃烧瓶，加入含有5mol/L盐酸胍、0.05mol/L二硫赤藓糖醇、 2.6mmol/L EDTA 的0.1mol/L Tris 缓冲液（pH8.5）中，通氮气，加塞，37℃过夜。离心弃上清，沉淀用蒸馏水洗涤2次。 9．  将沉淀再移入具塞玻璃烧瓶中，加入含有6mol/L尿素，34.7mmol/L SDS及含有0.05mol/L Tris 缓冲液（pH7.7）中，通氮，加塞，室温过夜，离心，弃上清。 10．重复9步，2次。离心取沉淀，蒸馏水透析至检测不到 SDS 为止。沉淀冷冻干燥得弹性蛋白制品。