细胞培养USEFUL

1.细胞：无论你是培养那种细胞，来源很重要，一般自己花钱从ATCC买来的就不用说了。若是别人“惠赠”，一定要请别人惠赠代数早一些的，状态好一些的，有些细胞拿来时状态就很差，还有小黑点，不是迫不得已最好别用了。若细胞是自己取材，千万注意无菌操作，取出的细胞可以用含高浓度抗生素的培养基洗一下，再换用实际所需的培养基培养。

2.培养基：DMEM主要用于贴壁细胞培养，1640一般用于悬浮细胞培养。对常规细胞我们实验室一直按照这个原则，除非有特殊要求。但是有时候将DMEM和1640各50%或按照一定比例混合，也可以达到很好的培养效果，原因是两种培养基中的成分会互补，对一些细胞会有帮助，尤其是刚复苏出来状态很差的细胞。

3.血清：若细胞珍贵，实验经费较足，一定使用进口，我们的经验是Gibico和hyclone的很好，对血清非常敏感的细胞我们首选Gibco。进口血清除非作细胞因子等免疫学检测，无需进行灭活。非重要细胞（预实验）或一次性实验细胞，可以考虑用国产血清，但国产血清由于太脏，建议灭活后使用，56度，30分钟，中间注意间断地混匀培养基，防止有效成分被持续高温破坏，使用前最好还是做一下无菌实验。使用国产血清，抗生素量可适当加倍。血清一般分装于-20度冻存，用多少拿多少，最好是4度缓慢融化，所以你要提前一天做好准备。

4.胰酶：贴壁细胞培养一般需要胰酶消化，对某些半贴壁细胞，虽然protocol不建议用胰酶消化，但若是贴壁较牢，你硬是要用滴管吹，反而会对细胞早成更大的伤害。我们用的胰酶是用1640培养基配置的，浓度为0.5%，使用效果不错。关于消化的度的问题，是一个经验来的，说是看到细胞变圆，大部开始脱落就可以终止了，但我觉得还是根据特定细胞来定。注意细胞消化千万不能过，以前养293细胞，消化过了会产生纤维状的的丝，部分细胞聚在一起很难打散。胰酶消化前，细胞最好用PBS或Hank's液（我没用过）稍微洗涤一下就好了，这样很容易消化。如果偷懒，不洗也行，但消化较慢，因为残留的血清成分会有一些中和。

5.细胞活力和增殖试：现在大家常用的是MTT法，很经典。但是现在有更简单好用的方法，使用alamarBlue! 具体方法大家可以自己查，我知道深圳雅为生物开发公司有改产品，其他代理我不太清楚。该法的优点是染色后的细胞可以继续进行培养或作其他实验，只需在检测完更换一下培养基就好了。但可能实际较贵，25ml价格约1400元，一般使用量96孔板，20ul/孔。