巨噬细胞培养
巨噬细胞属免疫细胞,有多种功能,是研究细胞吞噬、细胞免疫和分子免疫学的重要对象。巨噬细胞容易获得,便于培养,并可进行纯化。巨噬细胞属不繁殖细胞群,在条件适宜下可生活 2 - 3 周,多用做原代培养,难以长期生存。 我爱生物 5ibio
巨噬细胞也建有无限细胞系,大多来自小鼠,如 P338D1 、 S774A.1 、 RAW309Cr.l 等,均获恶性,培养中呈巨噬细胞形态和吞噬功能,易于传代和瓶壁分离,但难以建株。
培养巨噬细胞可用各样方法和各种来源来获取细胞,以小鼠腹腔取材法最为实用,其法如下:
1、实验前三天,向小鼠腹腔内注入无菌硫羟乙酸肉汤 lml (勿注入肠内!),以刺流产生大量的巨噬细胞。 生物实验网
2、引颈处死小鼠。
3、手提鼠尾将其全浸入 70% 乙醇中 3 - 5 秒。 做最大最全的生物试验方法网站
4、置动物于解剖台,用针头固定四肢,持镊撕开腹部皮肤,但勿伤及腹膜壁,把皮肤拉向上下两侧,暴露出腹膜壁。
5、用 70% 酒精擦洗腹膜壁,注射器吸 10ml Eagle 液注入腹腔中,同时用手指从两侧压揉腹膜壁,使液体在腹腔内流动。
6、用针头轻挑起腹壁并微倾向一侧.使腹腔中液体集中于针头下吸取入针管内。
7、小心拔出针头,把液体注入离心管。 做最大最全的生物试验方法网站
8、4 ℃下 250g 离心 10 分钟后,去上清,加 10ml Eagle 培养基。
9、计数细胞。每只鼠可产生 20 一 30 × 106 细胞,其中 90% 为巨噬细胞。
10、以 3 × 105 个贴附细胞 / 平方厘米接种。
11、接种数小时后,除去培养液,可去除其它白细胞,纯化培养细胞,用 Eagle 液冲洗 1 一 2 次,再加新 Eagle 培养液置 CO2 温箱中。