RAW264.7细胞株的传代

我养的是RAW264.7细胞株，前面有战友都提到过这种细胞的消化传代，但是因为这种细胞最大的特点是贴壁特别强， 每次传代都很难消化下来， 刚开始使用胰酶消化，发现37度， 消化15min细胞也还是吹不起来，后来又用单纯的用细胞刮刀刮的办法，但是这样养了一段时间，发现细胞损伤非常大，贴壁性变差，生长缓慢，后来使用了现在这个方法，到现在细胞的生长状况一直很好!

简述如下：

1) 将培养瓶内旧的培养液弃掉， 然后用D-Hanks液洗两次，(一定要洗干净，以免影响胰酶的消化作用)

2) 加入0.25%胰酶-EDTA消化，25cm培养瓶加0.4ml， 37度消化5min，镜下看到细胞变圆，间隙增大。

3)立即加含10%FCS的培养液终止消化，用细胞刮刀轻刮，注意，这时候用吸管吹不下来，但是刮刀却很容易刮下来，而且对细胞的损伤极小

4)离心，弃上清，加新的培养液(10%FCS)，小心吹匀，分装入新的培养瓶

此法屡试不爽，细胞生长饱满圆润，再也没出现过以前那种情况。