动物气管和支气管假复层纤毛柱状上皮细胞的培养

实验材料：

1. 大鼠或兔的气管和支气管

2. 0.1%中性蛋白酶或0.125%胰蛋白酶和0.01%EDTA混合消化液

3. 不含Ca2+ 和Mg2+ 的1×PBS（pH 7.4），含青霉素100u/ml和链霉素100μg/ml，pH7.4

4. 解剖剪、解剖镊、眼科剪，眼科镊

5. 一次性注射器（1ml或5ml）

6. 200目不锈钢网筛

7. 离心管（15ml、50ml）

实验方法：

1. 在无菌条件下取气管或支气管，用PBS反复冲洗，以除去血液和粘液。

2. 将气管或支气管的一端结扎，另一端插套管并固定。用注射器经套管注入1%中性蛋白酶，至气管充盈为止。将气管浸泡于PBS中，在37℃条件下消化20min。

3. 用注射器抽取培养液，将注射器插入套管，反复冲洗，以分离气管上皮细胞。然后，将气管或支气管游离端的结扎线剪断，回收管腔内的细胞悬液。

4. 用200目不锈钢网筛过滤，将滤液离心（1000r/min，10min）。弃上清液后，再用培养液洗涤离心1次。

5. 用培养液悬浮沉淀细胞，调整细胞密度至5×106 个/ml，接种于培养皿或培养板，放入37℃、5% CO2 培养箱内培养。