凋亡荧光素检测系统常见问题

1.  什么是细胞凋亡？  答：高等真核生物的大多数细胞，在丧失生理功能或严重受损时，激活固有的细胞自杀程序而自灭。这一过程称为细胞程序化死亡。细胞凋亡这个词指细胞程序化死亡所表现的生化和形态变化，其中包括细胞收缩、膜泡化、染色质浓缩和降解成小片段。细胞凋亡中的细胞经常降解成为膜包裹的凋亡体，被巨噬细胞或邻近的细胞吞噬或消化，但不产生炎症反应。McConkey和Orrenius作了这方面的综述。   2.  什么是细胞凋亡荧光素检测系统？  答：细胞凋亡荧光素检测系统是一个非放射检测系统，用于在含细胞凋亡和非细胞凋亡的细胞群体中，特异地、定量地检测细胞凋亡细胞。   3.  细胞凋亡荧光素检测系统的工作原理如何？  答：Promega公司的细胞凋亡荧光素检测系统依据TUNEL测试方法（TdT介导的dUTP缺口和末端标记）。它测量的是细胞核DNA降解成小片段，这一细胞凋亡的重要生化指标。用末端脱氧核苷转移酶（TdT）在细胞凋亡过程中，细胞形成的DNA小片段的3`-OH末端，催化加入荧光素-12-dUTP。荧光素-dUTP标记的DNA能直接用荧光显微镜观察，或用流式细胞仪定量化。   4.  细胞凋亡荧光素检测系统有哪些优点？  答：简便、灵敏。 简便： 细胞凋亡荧光素检测系统是一种直接测定细胞凋亡的荧光方法。不需要二抗保温。  灵敏： 在细胞凋亡的早期，可定量地在单细胞水平测定细胞凋亡。   5.  细胞凋亡荧光素检测系统能分析哪些类型的细胞？  答：细胞凋亡荧光素检测系统能分析多种系统，包括培养的细胞、冰冻的细胞、福尔马林固定和蜡包埋的组织切片。   6.  细胞凋亡荧光素检测系统能和抗体细胞染色一起用吗？  答：在参考文献中，介绍了测定增殖细胞核抗原，来检测DNA复制位点的方法，作为细胞增殖的指标。需同时检测活或死亡的细胞时，可用细胞凋亡荧光素检测系统，检测死亡的细胞，并同时用PCNA抗体染色细胞，在DNA复制位点测定PCNA。   7.  在实验中能诱导细胞凋亡吗？  答：能用各种方法诱导细胞凋亡。用DNA拓扑异构酶I抑制剂，喜树碱处理细胞，可在HL-60细胞中诱导细胞凋亡。从生长因子依赖型细胞株中除去生长因子，可诱导细胞凋亡。在体外用素地米松处理，可在小鼠的胸腺淋巴细胞中诱导细胞凋亡。带有Fas或TNF-受体的细胞，用各自的配体激活，或用激动剂抗体作交叉反应可诱导细胞凋亡。   8.  是否必须用不含甲醇的甲醛来固定细胞？  答：可用不含甲醇的甲醛或顺甲醛来固定细胞。两种方法同样有效。   9.  从何处购买不含甲醇的甲醛？  答：可从Polysciences公司购买不含甲醇的甲醛（10%）。   10.  固定在玻片上的细胞在保存后能否再用？  答：如需要，可将有固定化细胞的玻片放在70%的乙醇中，-20℃保存2周。   11.  细胞凋亡荧光素检测系统能否和生物素-dUTP一起使用？ 答：Promega公司目前只提供荧光素凋亡检测系统。不能和生物素-dUTP一起使用。Promega公司的DeadEnd 比色法细胞凋亡检测系统，用TdT和生物素化的核苷酸标记和测试细胞凋亡。   12.  应用什么滤光片检测细胞凋亡的细胞的绿色荧光？  答：用荧光显微镜检测细胞凋亡的细胞的绿色荧光，经碘化丙锭染色非细胞凋亡的细胞, 呈现红色背景。用普通的荧光素激活和发射滤光片520+/- nm 观察细胞凋亡的细胞。在>620 nm 时观察碘化丙锭的红色荧光。