细胞培养板的选择和使用（二）

(一)细胞培养板的密闭和污染问题：

细胞培养板的加样和操作：细胞培养板在进行细胞操作时同样遵循严格无菌的原则，各项操作要保证规范、科学，不对细胞的生长造成额外的影响。这其中最常见的问题就是如何保证加样后细胞的均匀和尽量减少换液对细胞生长状态的影响。

问：96，24孔培养板或培养皿的盖子都很松，这样是方便了透气，但是细菌、霉菌等污染物会不会也随着溜进去呢？

答：1.盖子很松，属于半开放培养，这样的目的是透气（实际上是为了使培养皿外的co2能够与培养皿充分交换，维持培养基的pH值）。

2.凡事有利必有弊，这样当然增加了污染的可能性。此外这样还会使培养皿内的液体蒸发，这对于精确定量的药物来说就显得值得注意了。所以以下二条措施是必须的a培养箱内空气必须清洁（定期紫外线照，酒精擦洗，尽量少开关培养箱）b培养箱内的湿度必须始终保持为100%（培养箱内放置无菌蒸馏水的水槽）。

就好像培养皿，也是一个盖倒扣的容器，也不会污染。主要是因为盖子“L”型边缘产生气流负压的缘故，灰尘上面才附着有微生物，而气流携带的灰尘是无法通过产生负压的盖边缘的。而透气作用只是通过空气的扩散，不会产生气流，所以只会透气不会透菌。

我使用24孔板，在其中的某些孔中有操作(在超净台内)，而其他孔中还有细胞要培养.我很担心这样会污染，不知道要注意什么?大家不知道有什么好的建议。

在超净台内如果操作规范的话应该可以的，我想你可以充分利用培养版的盖子，尽量只暴露要操作的孔，将其他孔用盖子盖起来。这是我的一点粗浅的见解，抛砖引玉吧！

使用前综合考虑一下，充分使用所以的孔；如果只需要使用少数的孔可以只用一边的，其余用盖子盖住，我习惯于先用右侧的孔（右手加样方便）。

其实自己感觉只要注意无菌操作，一般是不会污染的。操作时用几块玻片把板子一侧垫高，不要把盖子全打开，一般没问题。

(二)细胞分布不均及解决办法：

问：我的细胞接种培养板，细胞总是聚集在周边部分，该如何处理啊？我看园子里有的战友的细胞却是聚集在中间，是不是板子的质量问题啊？

答：请问你的细胞是如何混匀的？是滴管吹打还是振荡培养板？如果是后者，而且是转圈摇匀的话，很有可能由于离心力的作用使细胞甩到周边部分，导致细胞中间少，四周多！自己可是试试！

周边一般是相对会多一点，但是中间的数量也不会很少啊~~ 铺板的时候我也没有特异去振荡培养板。

大概是板子的质量问题吧或者是不是铺板时候的细胞密度太低了？我用的corning的板 。

一个好办法：在你培养种板之前，把培养板放入培养箱里进行几个小时的饱和后再取出，种入细胞时力量要轻，可采取用滴头在培养板孔的侧面慢慢加入让细胞悬液流入板孔中，培养的细胞基本是均匀生长。记住千万不要用振荡器振荡，否则你的细胞就会想你说得那样聚积在一起。

我今天把培养板放入培养箱里几个小时，适当的把细胞密度加大了一下，另外多加了一点培养液，今晚看细胞铺的挺好的。