RNAi 知多少

随着 RNAi 现象的发现和研究到 microRNA 成为全球生物研究者关注的热点，与其相关的各种概念不断刷新我们的认识，siRNA、shRNA、microRNA、pre-miRNA、pri-miRNA、microRNA mimic、microRNA inhibitor 、agomir、antagomir，各种 RNA 让刚刚接触 RNAi 的人头昏脑涨，那么，现在让我带大家认识一下他们各自有什么特点，有什么关系。siRNA 是 dsRNA 在 Dicer 酶作用下裂解成 21-25 个核苷酸的小干扰 RNA，化学合成的 siRNA 一般正义链和反义链都是 21 个碱基，正义链是 19 个碱基的靶序列加 3‘ 端 TT 悬头，反义链是 19 与正义链互补的碱基加 3 ‘端 TT 悬头。shRNA 即 short hairpin RNA，shRNA 表达载体 在polIII 启动子控制下转录的短发夹 RNA，包括两个短反向重复序列，中间由一茎环（loop）序列分隔的，组成发夹结构，3 ‘端有 UU 悬头，一个已知有效的 siRNA 序列如果需要较长一段时间内维持沉默效应，则 shRNA 系统是更优选择。成熟的 miRNA 是由较长的初级转录物经过一系列核酸酶的剪切加工而产生的，初级转录物称为 pri-miRNA。pri-miRNA 长度从几百到几千个碱基不等，带有 5‘帽子和3’polyA 尾巴，以及 1 到数个发夹径环结构。Pri-miRNA 经剪切产生约 70 个碱基的 miRNA 前体，即 pre-miRNA。pre-miRNA 为单一发夹结构，5‘带有磷酸基团，3’有两个突出碱基，并带有 3’羟基。pre-miRNA 经进一步剪切，形成长度约为 22 个碱基的单链成熟  miRNA。microRNA mimic 是模拟活体 microRNA活性来能增强内源性 miRNA 的功能的 microRNA 模拟物，化学合成有单链的也有双链的。microRNA Inhibitor 是化学合成的成熟 miRNA 互补单链，用来抑制内源性的 microRNA 的功能。特异的 microRNA inhibitor 能够被导入到表达特异的 microRNA 的细胞内，抑制 microRNA 的作用，也可以用来抑制表达特异的内源性的 miRNA 的报告载体的表达。Agomir（microRNA 激动剂）是经过特殊标记和化学修饰的双链小 RNA ,通过模拟内源性的 microRNA 来调节靶基因的生物学功能。antagomir 是根据 microRNA 成熟体序列设计，经过特殊标记与化学修饰的单链小 RNA ,是专门用于抑制内源性 microRNA 的高效阻断剂。