植物体内抗坏血酸氧化酶活性的测定实验

抗坏血酸氧化酶在有氧情况下，能氧化抗坏血酸成脱氢抗坏血酸，同时促进其氢与空气中的氧结合成水。
抗坏血酸氧化酶的测定是在该酶的最适pH及适宜的温度下，向反应瓶中加入一定量的底物（抗坏血酸）及酶提取液，让酶作用一段时间，然后测定底物被消耗的数量来计算酶的活性。抗坏血酸被消耗的量，可用碘液滴定剩余的抗坏血酸来测定。反应式如下：
上述式中I2来自以下反应：
KIO3 + 5KI + 6HPO3 --→ 3I2 + 6KPO3 + 3H2O

材料与仪器

水稻黄化幼苗 马铃薯块茎 植物叶片
磷酸盐缓冲液 抗坏血酸 偏磷酸 淀粉溶液 碘酸钾配制 碘液配制
研钵 50 ml量筒 50 ml三角瓶 微量滴定管 滴定架 移液管 移液管架 恒温水浴 洗耳球

步骤

一、实验步骤
1. 酶液提取
称取新鲜样品（水稻黄化苗2～3g，马铃薯块茎用5g）剪碎置研钵中，加少量石英砂及pH6的磷酸缓冲液，迅速研磨成匀浆（事先将缓冲液用冰水冷却，不使研磨时温度增高）。把全部材料用缓冲液洗入50 ml容量瓶中，定容至刻度。放在18～20℃水浴上浸提30min（其间摇动数次）。然后将上清液（酶浸提液）用棉花过滤于干净的三角瓶中备用。
2. 酶活性的测定
取3个50 ml三角瓶，标上号码，按下表准确加入各项试液:

先在各瓶中加入pH6磷酸缓冲液4 ml，0.1％抗坏血酸2 ml, 并向3号瓶加入10％三氯乙酸1 ml，以每隔1 min在各瓶中依次加入酶液3 ml（视酶活性增减酶用量），准确记录加入酶液的时间，摇勺后将各瓶在18～20℃水浴中酶促反应5 min后，立即向1、2号瓶各加入10﹪三氯乙酸1 ml，以终止酶的活动，然后各瓶加入1％淀粉液3滴作指示剂，用微量滴定管以mol碘液进行滴定，以出现浅兰色为滴定终点。记录滴定值。

常见问题

酶活性的计算：