如何做好裸鼠皮下荷瘤【新手入门】

裸鼠荷瘤就是将细胞或组织通过原位或皮下移植到裸鼠体内，使其成瘤。无胸腺裸鼠（Nude Mouse，简称裸鼠）目前是医学生物学研究领域中不可缺少的实验动物模型。由于其先天性胸腺缺陷，缺乏T淋巴细胞功能，导致其在肿瘤学、免疫学、药品与生物制品的安全性评价及有效药品的筛选等实验方面，有着很高的研究价值。

优点：

1. 让一群裸鼠带有相同肿瘤，生长速率大致相同，个体差异较小，存活率高；

2. 可连续移植，肿瘤长期保留；

3. 实验周期较短，实验条件易于控制；

4. 对宿主的影响类似，可以客观判断疗效。

实验过程

细胞准备

1. 同的细胞成瘤能力不同，在选择时应根据实验目的和具体情况综合考虑。如乳腺癌细胞系MCF-7虽然经常用于体外实验，但成瘤率差，生长慢，因此一般不考虑。

2. 一般分为鼠源的和人源的细胞系，鼠源的一般更容易成瘤，但人源的更贴近人类肿瘤生长情况。

3. 取冻存于液氮的肿瘤细胞复苏并扩增，确保肿瘤细胞的活力和较好的生长状态。一般鼠源肿瘤细胞接种2-100万/只，人源的细胞系需要200-1000万/只以上。可结合细胞和裸鼠的实际情况，最高可以注射1000万/0.1ml，不可再高，因为细胞几乎达到饱和状态。

注意计算好细胞用量，一般要多准备5只裸鼠左右细胞用量。

裸鼠准备

一般选择5-6w龄的裸鼠，太小死亡率太高，太大免疫力会增强，不易成瘤。如无特殊要求雌雄均可。

接种步骤

1. 胰酶消化细胞，计数后将其重悬于生理盐水中；

2. 选择进针部位（一般选择腋下或腹股沟等血管丰富的部位），用酒精棉球擦拭进针部位；

3. 向前方穿行，注射前针头左右动一下，若无阻力则证明在皮下，否则可能在皮内或肌肉里面；

4. 缓慢推注，一般体积为100-150μL，注射完后缓慢拔出针头，可在注射部位看到明显的鼓包；

5. 接种点离进针点尽量远一些，防止漏液和污染。

   
   

6. 

结果处理

一般接种5天后即可看到肿瘤出现，根据实验要去的生长天数，达到时间后颈椎脱臼处死裸鼠，取出肿瘤，拍照。拍照时需要放置两把直尺，可用于后期计算肿瘤体积。

数据提交示例

拍照时注意光线，标尺摆放整齐，对焦不要模糊，另还需提交带有各肿瘤体积的EXCEL表，如下所示：

问题解答:

（1）瘤子长不出来是怎么回事？

一方面可能是细胞状态差，活力不好，或是肿瘤细胞不易成瘤，需加入Matrigel辅助或增大接种量或更换细胞系；一方面可能是小鼠周龄太大，或小鼠免疫排斥，建议更换免疫缺陷程度更大的小鼠（Nod-scid小鼠，NOG小鼠＞Nude裸鼠）。

（2）小鼠瘤子长起来又消失？

肿瘤块先缩小，后变大很常见，很可能是炎症反应，肿瘤细胞被小鼠自身吸收，继续观察肿瘤细胞吸收之后是否经过几周还能长出来，长不起来建议换鼠。

（3）均一性很差，肿瘤体积差距较大？

如果荷瘤分组发现小鼠肿瘤体积差距很大，这可能跟小鼠周龄及接种细胞量不一致导致，建议重新做实验分组。

（4）是否可以在一只小鼠进行多个点荷瘤？

不可以，一只老鼠就只能接种一个点。因为一个老鼠身上有多个肿瘤块的情况下，可能会相互影响。

（5）是否应用免疫抑制剂加速肿瘤生长？

如果裸鼠荷瘤不生长，可以参考文献，用免疫抑制剂如环磷酰胺（抑制裸鼠NK细胞活性）促进生长；不过最好不要为了缩短造模周期来加速生长，因为可能会造成溃烂，这样就不得不中止实验。所以一般情况下，应尽量符合细胞系本身的生长特性，不应过多地人为的干扰。