TSA多色免疫荧光技术教程

一、实验原理

TSA技术利用辣根过氧化酶（HRP）对靶蛋白或核酸进行高密度原位标记。在过氧化氢（H2O2）环境中，非活性的酪胺分子（T）被二抗偶联的HRP催化激活，发生大量的酶促反应
成为具有短暂活性的中间态分子（T*）并形成共价键结合位点与邻近蛋白（包括靶抗原蛋白、一抗、二抗及HRP）的富电子区域（如色氨酸、组氨酸和酪氨酸残基）发生共价偶联而沉积。
偶联在酪胺分子上的荧光染料从而在共价偶联蛋白周围大量沉积，使信号被有效放大。

一、实验原理

TSA技术利用辣根过氧化酶（HRP）对靶蛋白或核酸进行高密度原位标记。在过氧化氢（H2O2）环境中，非活性的酪胺分子（T）被二抗偶联的HRP催化激活，发生大量的酶促反应
成为具有短暂活性的中间态分子（T*）并形成共价键结合位点与邻近蛋白（包括靶抗原蛋白、一抗、二抗及HRP）的富电子区域（如色氨酸、组氨酸和酪氨酸残基）发生共价偶联而沉积。
偶联在酪胺分子上的荧光染料从而在共价偶联蛋白周围大量沉积，使信号被有效放大。

三、注意事项

1.实验前应设计好实验方案，包括一抗与TSA荧光染料的搭配以及染色的顺序。

2.尽量选择特异性高的一抗，以确保染色结果的准确性。

3.低表达指标尽量与高亮度染料搭配，高表达指标与低亮度染料搭配，以优化染色效果。

4.实验过程注意避免切片干燥，以免影响染色结果。