如何正确进行考马斯亮蓝染色?
一、实验准备
首先,你得准备好这些“主角”和“配角”:SDS-PAGE电泳分离后的蛋白质凝胶、考马斯亮蓝染色液、去染液、染色容器、水平摇床等。这些可都是染色过程中的“必备神器”哦!
二、 染色步骤
▲电泳后处理:将电泳后的凝胶取出,放入加有超纯水的平皿中润洗一下,去除残留的电泳液。这一步就像是给凝胶“洗个澡”,让它干干净净地迎接接下来的染色过程。
▲加入染色液:将染色液倒入染色容器中,然后将凝胶放入染色液中,确保凝胶完全浸没在染色液中。接着,将染色容器放在水平摇床上震荡染色。染色时间一般在30分钟到2小时之间
具体取决于凝胶的厚度和温度。这个过程就像是给凝胶“穿上一件蓝色的外衣”。
▲观察染色情况:在染色过程中,要时刻注意观察凝胶的变色情况。当看到清晰的蛋白质染色条带时,就说明染色已经差不多了。这时候,就要及时停止染色,避免背景颜色过深。
三、去染步骤
▲倒出染色液:染色结束后,将染色液倒出或回收(注意:染色液可以回收使用3次左右哦!)。
▲加入去染液:将去染液倒入染色容器中,确保凝胶完全浸没在去染液中。然后,继续将染色容器放在水平摇床上震荡去染。
去染的目的是去除未与蛋白质结合的多余染料以及可能存在的背景染色。
▲调整去染时间:去染时间的长短会影响背景颜色的深浅。一般来说,去染时间越长,背景颜色越浅。你可以根据实验需求调整去染时间,直到背景清晰、蛋白质条带清晰可见为止。
四、观察与记录
最后一步啦!将凝胶放在显微镜下观察结果,用相机或扫描仪记录下这美妙的瞬间。看着那些被染成蓝色的蛋白质条带,是不是很有成就感呢?
五、注意事项
在染色过程中,要确保染色液和去染液都充分接触到凝胶的每一部分,避免出现染色不均的情况。
染色和去染的时间要根据实验需求进行调整,避免染色过深或过浅。
在操作过程中要注意安全,避免染料溅到皮肤或眼睛中。