琼脂糖凝胶电泳步骤

‌一、实验准备‌

在开始实验之前，首先需要用蒸馏水将制胶模具和梳子冲洗干净，确保无杂质残留。随后，将模具放置在制胶平板上，并架好梳子，为后续的凝胶制备做好准备。

①‌凝胶缓冲液配制‌：根据欲分离的DNA片段大小，用凝胶缓冲液（如TAE或TBE）配制适宜浓度的琼脂糖凝胶。一般而言，常用浓度为0.5%至2%，但具体浓度需根据实验需求确定。

二、凝胶制备

‌㈠琼脂糖溶解‌：准确称量琼脂糖干粉，加入配制的三角烧瓶内，再加入适量的电泳缓冲液。放入微波炉内加热至琼脂糖完全溶解，期间需不时摇动烧瓶以防溢出。

㈡凝胶冷却与染料添加‌：待琼脂糖溶液冷却至适宜温度（约60℃左右，不烫手），加入适量的核酸染料（如EB或GelRed），轻轻旋转以充分混匀凝胶溶液。注意，EB存在毒性，操作时应佩戴防护手套。

㈢铺胶‌：将冷却后的凝胶溶液缓缓倒入已准备好的模具中，注意避免产生气泡。室温下静置约20-30分钟，直至凝胶完全凝结。

三、电泳前准备

‌①梳子拔出与凝胶放置‌：凝胶凝固后，小心拔出梳子，避免破坏凝胶。将凝胶放置在电泳槽内，确保样品孔位于电场负极一侧。

②电泳缓冲液加入‌：向电泳槽中倒入适量的电泳缓冲液，液面应略高于凝胶表面，约1mm左右。检查样品孔内是否有气泡，并设法去除。

四、上样与电泳

‌①样品准备‌：在DNA样品中加入适量的Loading Buffer，混匀后使用加样器将混合液缓慢加入凝胶的样品孔中。注意避免样品溢出或污染其他孔。

‌②电泳设置‌：接通电源，设置电泳参数。一般情况下，电压可设置为50V至120V不等，电泳时间根据实验需求确定。DNA样品在电场作用下由负极向正极移动。

五、电泳后处理

㈠‌观察结果‌：电泳结束后，关闭电源。取出凝胶，在凝胶成像仪或紫外分析仪上观察电泳结果。DNA存在处会显示出亮色荧光条带（如EB为橙红色，GelRed为红色或绿色），通过与标准的核酸Marker比较，可以估算出扩增产物的大小。

㈡数据记录与分析‌：记录并分析电泳结果，根据需要进行后续实验或数据处理。
六、注意事项

①凝胶浓度选择应根据样品DNA分子大小而定。

②操作过程中应避免产生气泡，以免影响电泳结果。

③微波炉加热琼脂糖时需小心操作，以防突然产生气泡导致溢出。

④EB等核酸染料具有毒性，操作时应佩戴防护手套。

⑤电泳缓冲液多次使用后应及时更换，以免影响电泳效果。

通过以上步骤，可以完成琼脂糖凝胶电泳实验，对DNA片段进行分离、鉴定和纯化。