EMSA凝胶迁移实验步骤

一、实验准备

Step1：试剂与材料

Step2：标记好的DNA探针

Step3：蛋白质样品

Step4：结合缓冲液

Step5：非标记的竞争性DNA

Step6：10%聚丙烯酰胺凝胶

Step7：电泳缓冲液

Step8：染色液（如溴化乙锭）

Step9：仪器与设备

Step10：电泳仪

Step11：离心机

Step12：微量移液器

Step13：凝胶成像系统

二、实验步骤

DNA探针与蛋白质样品的准备

步骤一：根据实验需求，将DNA探针进行标记，如使用γ-32P-ATP进行末端标记。

准备适量的蛋白质样品，确保浓度适当。

步骤二：结合反应

在微量离心管中，加入适量的结合缓冲液、标记好的DNA探针和蛋白质样品。

根据需要，加入非标记的竞争性DNA以评估结合的特异性。

将混合液充分混匀后，在室温下孵育一定时间，使蛋白质与DNA充分结合。

制备聚丙烯酰胺凝胶

按照说明书，制备10%的聚丙烯酰胺凝胶。

将凝胶倒入电泳槽中，确保凝胶表面平整。

待凝胶凝固后，将电泳槽与电泳仪连接。

步骤三：样品加载与电泳

在结合反应结束后，将样品加入凝胶的样品孔中。

加入电泳缓冲液，确保凝胶完全浸没在缓冲液中。

打开电泳仪，设置适当的电压和时间，进行电泳分离。

步骤四：凝胶成像与结果分析

在电泳结束后，将凝胶取出，用染色液（如溴化乙锭）进行染色。

将染色后的凝胶放入凝胶成像系统中，观察并拍照记录结果。

分析凝胶图像，观察蛋白质与DNA的结合情况，以及竞争性DNA对结合的影响。