免疫共沉淀—实验操作流程和步骤

下面是免疫共沉淀实验的实验步骤和操作流程：

    1. 样品处理：将细胞或组织样品进行裂解，得到待检测的蛋白质混合物，并加入蛋白酶抑制剂以避免目标蛋白被降解。样品来源可以是生物内提取、组织培养等。

    2. 共价固定抗体：将专一的抗体连接到亲和树脂上（如蛋白A的亲和树脂或蛋白G的亲和树脂）或将蛋白与其特异性抗体结合，新形成的复合物与封闭剂缓慢摇摆在二氧化硅珠上，将COOH基与Si-OH钝化，使碘酸钙交联后节制反应。

    3. 免疫共沉淀：将有抗体树脂的样品与吸附抗体树脂形成免疫复合物，INCUBATE用于免疫沉淀。硫酸铵沉淀可用于纯化蛋白。

    4. 洗涤：采用洗涤缓冲液对样品进行洗涤，以去除非特异性的蛋白质和杂质，同时尽量避免对复合物的影响。洗涤缓冲液选择对样品不会引起较大影响的缓冲液和洗涤剂。

    5. 后续实验：将沉淀的复合物通过SDS-PAGE分离出来，并进行Western blotting检测目标蛋白及其配偶蛋白。另一方面，也可以直接使用质谱分析检测。

    总之，免疫共沉淀实验是一种通过抗原-抗体相互作用来捕获特定蛋白质交互作用信息的高通量低污染方法。在进行实验时，在样品处理、试剂准备等关键步骤上需注意实验设计并设置对照实验，以确保得到可靠的结果。