油红O染色实验步骤与注意事项

        一、油红O染色实验准备

        1、仪器耗材：生物组织摊烤片机、3DHISTECH扫描仪、显微镜、盖玻片、载玻片

        2、染色试剂：普拉特泽改良油红O染色液、甘油明胶、无水乙醇、二甲苯

        3、待测组织的冰冻切片

        二、油红O染色实验步骤

        1、冰冻切片厚度6～10 µm，不固定或10%福尔马林固定10 min后水洗。

        2、切片入蒸馏水中稍冲洗。

        3、切片入70%的乙醇内浸洗20～30 s。

        4、切片入改良油红O染色液中(加盖)，密闭染色10～15 min。

        5、分色：入70%的乙醇内稍洗以便去除染液。

        6、入蒸馏水中稍微清洗。

        7、苏木素染色液复染核1～2 min。

        8、(可选)1%的盐酸溶液稍微分化一下。

        9、(可选)自来水漂洗10 min或稀碳酸锂溶液中促蓝。

        10、入蒸馏水中稍微清洗。

        11、用滤纸吸干周围水分。

        12、甘油明胶或阿拉伯糖胶封固。

        三、油红O染色注意事项

        1、石蜡切片不能用于油红O染色，原因在于石蜡包埋过程中需要脱水，脱水过程中需要乙醇-二甲苯和石蜡，二甲苯是有机溶剂，会把中性脂肪溶解；、

        2、 冰冻切片准备时，包埋的降温过程建议选择干冰，原因在于若选择液氮降温过程较强烈，可能导致组织内部炸裂，而干冰降温的过程比较缓和，染出来的片子比较好看；

        3、切片的厚度要稍微厚一些，建议选择8-10 μm；

        4、实验设计建议设计阴性对照和阳性对照，如阳性对照可以用脂质丰富的肝脏组织等，阴性对照可以根据文献来选择无脂肪沉积的组织。