考马斯亮蓝染色法实验介绍

1、考马斯亮蓝染色介绍

考马斯亮蓝染色是用考马斯亮蓝进行蛋白质染色的方法。考马斯亮蓝是一种阴离子染料，常用考马斯亮蓝G250和R250。考马斯亮蓝G250在游离状态下呈红色，当它与蛋白质通过疏水结合后变为蓝色，蛋白质-色素结合物在595 nm波长下有最大光吸收。其光吸收值与蛋白质含量成正比，因此可用于蛋白质的定量测定。

2、考马斯亮蓝染色的历史

考马斯亮蓝染色最早由Fazekas等在1963年用于醋酸纤维素膜电泳，并认为同样可用于纸电泳，琼脂糖电泳和淀粉凝胶电泳。1965年Meyer等将此方法应用于聚丙烯酰胺凝胶电泳。

3、考马斯亮蓝染色的灵敏度

考马斯亮蓝染色可以达到0.2~0.5μg（200~500 ng），最低可检出0.1μg蛋白；银染的灵

敏度比考染高将近100倍，最低可以检出2 ng蛋白，通过考染条带的深浅粗细，可以大致判断该条带有多少蛋白。

4、考马斯亮蓝染料的种类

考马斯亮蓝分为R-150、R-250、R-350、G-250等。其中R-350最为灵敏，R为红蓝色，G为绿蓝色。R-250即三苯基甲烷，每个分子含有两个SO3H基团，偏酸性，与氨基黑一样也是结合到蛋白质的碱性基团上。G-250即二甲花青亮蓝，是一种甲基取代的三苯基甲烷。

推荐一种考染的方法

⑴电泳后的凝胶立即浸泡在固定液（500 ml乙醇，100 ml冰醋酸，400 ml蒸馏水）中

至少30 min，如有必要可在固定液中浸泡过夜；

⑵将固定后的凝胶在热的染色液（0.29 g考马斯亮蓝溶解在250 ml脱色液中，在使用前

边搅拌边加热至60℃）中浸泡10 min，然后用蒸馏水将凝胶淋洗一次；

⑶多次变换脱色液（250 ml乙醇，80 ml冰醋酸，加蒸馏水至1 L），直至凝胶背景脱净

为止，为加快脱色，可略加温度；以上各步最好用振荡器（摇床）震荡染色皿。

⑷为了防止凝胶干燥后的龟裂，脱去背景色的凝胶在保存液（25 ml 87%甘油加225 ml脱

色液）中浸泡30 min。然后将凝胶放在玻璃板上，再用保存液浸湿玻璃纸包住凝胶在室温下晾干。