植物组织样本DNA提取步骤

一、植物组织DNA提取仪器与设计准备

实验仪器：高速离心机；烘箱；冰箱；水浴锅；高压灭菌锅；Nanodrop。

实验试剂：玻璃珠，十二烷基磺酸钠(SDS)；三羟甲基氨基甲烷（Tris）；乙二胺四乙酸（EDTA）；氯化钠；苯酚；氯仿；无水乙醇等。

二、植物组织DNA提取步骤

植物组织的DNA提取通常采用机械研磨的方法破碎植物的组织和细胞，由于植物细胞匀浆含有多种酶类(尤其是氧化酶类)对DNA的抽提产生不利的影响，在抽提缓冲液中需加入抗氧化剂或强还原剂(如巯基乙醇)以降低这些酶类的活性。在液氮中研磨，材料易于破碎，并减少研磨过程中各种酶类的作用。详细操作步骤如下：

1、SDS提取缓冲液在65℃水浴中预热。

2、将叶片置于1.5ml离心管中，液氮速冻，组织研磨器打样。

3、加入700 ml的SDS提取缓冲液，涡旋摇匀。

4、置于65℃的水浴中，每隔10 min轻轻摇动，30 min后取出。5.加入200 ml KAc溶液，摇匀，放入-20℃冰箱30 min。

5、10000 rpm离心5 min，上清移至新离心管中，12000 rpm离心5 min。

6、上清移至新离心管中，加入700 ml异丙醇，-20℃冰箱30 min。

7、10000 rpm离心5 min，弃上清，加入500 ml 70%乙醇漂洗。

8、弃液体，晾干。

9、DNA纯度与浓度测定（使用nanodrop）。

DNA纯度：DNA的OD260/OD280一般为1.8左右。

OD260/OD280»1.8：说明较纯；

OD260/OD280>1.8：说明可能有RNA污染；

OD260/OD280<1.8：说明可能有蛋白质污染。

三、植物组织DNA提取注意

1.叶片磨得越细越好。

2.注意移液器的正确使用。

3.由于植物细胞中含有大量的DNA酶，因此，除在抽提液中加入EDTA抑制酶的活性外，第一步的操作应迅速，以免组织解冻，导致细胞裂解，释放出DNA酶，使DNA降解。