组织芯片制作注意事项

1、从供体蜡块中采集组织芯时,由于外检蜡块采用普通石蜡,其韧性差、质地硬容易碎裂和使打孔针弯曲,所以要细心、耐心地采集组织芯,并可以将外检蜡块在37℃预热后再采集。

2、构建好的TMA芯片中,要使组织芯和受体蜡块融合成一体,需要在55℃温箱加温.此时温度、时间调控十分重要,既要使组织芯不易掉片、滑片,又要防止受体蜡块融化移动组织芯位置。

3、芯片微陈列设计：在构建组织芯片之前,应该预先计划检测多少样本,然后相应地进行设计.对大多数研究来说,在一个常规的载玻片上放置60~100个样本已经足够了.当样本超过100例时,上样、切片、染色及研究各个步骤都要求相当熟练,并且由于样本排列过于紧密,有可能导致芯片制作和研究失败。

4、收集病例及相关蜡块:挑选出具有随访资料的不同发展阶段的肿瘤组织蜡块,根据HE切片对石蜡标本中有代表性的点进行标记,包括典型的肿瘤和相应的正常组织,以构建肿瘤组织芯片。

5、TMA受体蜡块制备:取97.5克莱卡石蜡+2.5克蜂蜡(2.5%)混合,制成长36 mm*宽26 mm*高17 mm的空白蜡块,在该蜡块20 mm×16 mm范围内设计10×8点组织陈列.组织四周预留0.5 cm-0.7 cm空间,用组织仪打孔制成TMA蜡块。

6、组织芯片

（1）在组织芯片制作机上用细针对受体蜡块打孔,孔径以1~1.5 mm比较适宜。

（2）同样在供体蜡块上标记的相应部位打孔采集组织芯.孔径同样为1~1.5 mm。

（3）将组织芯转移到受体模块的孔中,每个组织芯之间的间距以0.2 mm为佳。

7、为了防止在打点、切片、染色或免疫组化过程中出现漏点,滑片及掉片现象,每个样本可以上样1-2个点。

8、将构建好的TMA芯片蜡块放在相宜的塑料盒子内,并严密固定防止移位.放入55℃温箱中约10分钟,在蜡将要完全溶解前,取出室温下冷却,使受体模块的蜡与新插入的小圆柱状组织溶为一体,取下蜡块,于4℃冰箱中保存备用。

9、切片前,蜡块需在4℃中预冷4h左右,然后夹在切片机上进行修正,等修到全部组织完整为止.用-20℃预冷冰袋贴在蜡块上5-10 min左右,快速连续切片30-50张左右,再用冰袋冷冻组织块,或直接在冰冻切片机内进行,直至将组织切完为止.将4μm连续切片分别漂在凉水中,让其自然展开,按顺序将切片转移至45℃的温水中展片2 min左右,将其贴在浸有APES切片黏合剂的载玻片上晾干,60℃中烤片3 min左右,58℃中继续烤片18 h,-20℃保存备用。