活性氧检测化学发光法实验步骤

近年来，随着光电检测技术的不断进步,化学发光分析法已在医学、环境以及工业分析等许多领域里得到广泛的应用。而活性氧也在人体内的作用受到人们极大的关注,报道了大量有关活性氧，特别是超氧自由基和羟自由基与机体细胞的许多功能活动以及各种疾病，如癌、动脉硬化、糖尿病、心脑血栓、缺氧再灌注综合症、感染、以及衰老效应等，激发了人们去探索、深入地研究活性氧的各种特特性。

活性氧的化学发光研究也是活性氧测定法研究领域中比较活跃的分支之一，目前比较成功的活性氧化学发光测定法主要有鲁米诺法、光泽精法和甲壳动物荧光素法。本文就给大家简单盘一盘这几种方法的研究与应用情况。

1、鲁米诺法

鲁米诺是化学发光研究最常用的试剂之一，从某种意义来说，没有这一试剂的出现，化学发光研究很难有现在的水平,所以,对于鲁米诺的研究与应用一直都非常活跃。

鲁米诺在碱性介质既可以与OH自由基反应引起发光，也可以与O₂^-自由基或者单线态氧10₂以及H₂O₂发生化学反应的事实基本上得到公认。鲁米诺发光与否取决于活性氧的生成条件，而与鲁米诺溶液的酸碱度似乎没有直接的关系,介质的酸碱度影响了激发态APD的发光强度和发光波长，所以，从理论上来说，鲁米诺化学发光法可以应用于各种不同介质中的HOO、OH O测定，这就导致了测定选择性差的问题。因此,在许多情况下,活性氧的鲁米诺化学发光法只能作为定量或者定性分析的辅助手段。

2、光泽精法

与鲁米诺一样，光泽精(Lucigenin，N，N’dimethyl-99’-diacridinum)也是广泛获得使用的化学发光试剂之一，在发现鲁米诺化学发光后，Gleu和Petsch两人]于1935年报道了第一篇光泽精化学发光的论文,在碱性条件下，光泽精与H₂O_2、O_2-等过氧化物作用形成激发态N甲基吖啶(N methylacridan)并发出波长523nm的微弱光.相比之下，光泽精对于活性氧测定的选择性则相对比较高，有许多报道光泽精只有在超氧活性自由基存在下发生发光现象,但是,在实际应用中,过氧化氢的分解过程同样产生O_2-自由基，难以定性地判断分析结果，在光泽精对超氧自由基和羟自由基我们的研究结果也表明,在超氧自由基存在下,光泽精可以发出强烈的光,而羟自由基的存在并没有使得我们的仪器观测到任何的发光现象。

3、甲壳动物荧光素法

甲壳动物荧光素中最典型的一类试剂英文名称为Cypridina的荧光素,来自于日本海和加勒比浅海中的一种小甲壳动物，已经被应用于化学发光研究的有化学名称为2-methyl-6-phenyl-3，7-dihydroimi-dazo-[1，2-a]pyrazin-3-one的试剂，简称CLA.1。

CLA的特点是不与生物机体内的H₂O₂或者OH发生反应，只与O_2--或者1O₂发生特异性的化学发光反应，这一现象已被应用于白血球的功能性检查方面的研究。Suzuki等人还开发了CLA的衍生物，MCLA和FCLA。FCLA是目前化学发光试剂中发光波长(532nm)最长的试剂，发光效率比CLA高出近10倍，由于这一特点,在进行生物样品中·O-或者10测定时，能够有效地降低酶、OH等干扰物质的影响。