彗星实验/单细胞凝胶电泳实验操作步骤

彗星实验第一步：分离制备单细胞悬液：

（1）体外培养的细胞株：用胰酶消化，最后用PBS悬浮吹打成单细胞悬液，细胞要计数，具体的量我前边已经说过。

（2）体内脏器细胞：处死动物，取出脏器，于Hanks’液中制备成单个细胞悬液。

彗星实验第二步：胶板制备：

（1）取100μl于45℃水浴中保温的0.5%NMA，铺于磨沙载玻片上，形成底胶。盖玻片推匀，不能有气泡，4度凝固5至8分钟。

（2）水平取下盖片，取100μl于37℃水浴中保温的0.5%LMA与20μl细胞悬液（约400彗星实验）。第三步：细胞裂解与电泳：

（1）将制备好的胶板去掉盖玻片后，浸于4℃预冷的细胞裂解液中，在4℃下裂解2.5到3小时。

（2）取出胶板，用双蒸水浸没漂洗后放入电泳槽中，浸泡在4℃预冷的电泳液中解旋20分钟。

（3）玻片水平放置阳极端附近，4℃电泳20到25分钟（25V，300mA）。可在电泳槽周围加冰块以保持低温。

彗星实验第四步：中和与染色：

（1）电泳结束，将胶板浸泡于中和液中，每次10分钟，共中和3次，每次要更换中和液。最后晾干。

（2）取出胶板，置于染色缸中，在2μg/ml的EB染色液中，暗处染色5到10分钟。

（3）蒸馏水漂洗2次，每次5分钟。