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细胞技术

什么是彗星实验?

2025-02-10 细胞技术 加入收藏
彗星实验是一种有效评估DNA损伤的方法。其原理是器官或组织经处理(如辐射、重金属等)后,细胞中的DNA发生单链或双链断裂,经细胞及其核膜裂解后,DNA解旋,在电

彗星实验是一种有效评估DNA损伤的方法。其原理是器官或组织经处理(如辐射、重金属等)后,细胞中的DNA发生单链或双链断裂,经细胞及其核膜裂解后,DNA解旋,在电场作用下,DNA断片迁移出细胞核,形成彗星状的电泳图谱。

它能有效地检测并定量分析细胞中DNA单、双链缺口损伤的程度。当各种内源性和外源性DNA损伤因子诱发细胞DNA链断裂时,其超螺旋结构受到破坏,在细胞裂解液作用下,细胞膜、核膜等膜结构受到破坏,细胞内的蛋白质、RNA以及其他成分均扩散到细胞裂解液中,而核DNA由于相对分子质量太大只能留在原位。在中性条件下,DNA片段可进入凝胶发生迁移,而在碱性电解质的作用下,DNA发生解螺旋,损伤的DNA断链及片段被释放出来。由于这些DNA的相对分子质量小且碱变性为单链,所以在电泳过程中带负电荷的DNA会离开核DNA向正极迁移形成彗星状图像,而未受损伤的DNA部分保持球形。

DNA受损越严重,产生的断链和断片越多,长度也越小,在相同的电泳条件下迁移的DNA量就越多,迁移的距离就越长。通过测定DNA迁移部分的光密度或迁移长度就可以测定单个细胞DNA损伤程度,从而确定受试物的作用剂量与DNA损伤效应的关系。该法对检测低浓度遗传毒物具有高灵敏性,有研究的细胞不需处于有丝分裂期,而且只需要少量细胞的优点。


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