酵母遗传学方法11：PCR介导基因破坏法

PCR 介导基因破坏法

1． 反应混合物：

5 μ l             10 × Taq 缓冲液

5 μ l             25mmol/L MgCl2

2 μ l             10mmol/L dNTPs

10~100ng         模板 DNA

25pmols          引物（每种引物）

0.5 μ l            Taq DNA 聚合酶（ 2U ）

2． PCR 循环参数：

94 ℃           5 分钟

94 ℃           1 分钟

55 ℃           1 分钟

72 ℃           2 分钟

10 个循环

94 ℃           1 分钟

65 ℃           1 分钟

72 ℃           2 分钟

20 个循环

72 ℃           10 分钟