裸鼠皮下成瘤实验操作注意事项

1、裸鼠成瘤细胞系的选择与状态

并非所有的肿瘤细胞都可以成瘤。在正式做实验之前，建议去查查ATCC上面的测试数据。如果不得不用不能独立成瘤或者难以成瘤的细胞系，请看第三点选NOD SCID小鼠，以及第四点的Matrigel法。

细胞的状态是成瘤实验的关键，所以细胞生长状态一定要好，取处于对数生长期的细胞，细胞达80-90%左右密度为宜。收集细胞前一天晚上更换新鲜培养基。

2、成瘤细胞的处理

细胞消化后应尽快接种到裸鼠皮下，一般尽量在半小时内完成，途中将细胞悬液放在冰上降低细胞的代谢。细胞接种量1*10⁷/200ul/只，或者浓缩为1*10⁷/100ul/只，根据肿瘤细胞成瘤效果调整细胞量，最高不要超过1*107。接种肿瘤实验一般采用4--6周龄的裸鼠，裸鼠太老会加大成瘤难度，放大个体差异。

3、裸鼠成瘤接种部位

选择的裸鼠一般在5-8周龄，体重18-20g左右，种植部位选择血供丰富区域，如腋窝中后部、腹股沟中上部、背部、腋下、颈部均可以，当然腋下和颈部效果最好。

4、裸鼠皮下接种操作

接种前用枪将细胞悬液充分的吹散，防止细胞成团而降低细胞成活率；接种时，针头在皮下进针深一点，约1cm深，减少注射后细胞悬液从针眼溢出；左手拇指和食指捏紧裸鼠颈背部皮肤，小拇指夹住裸鼠尾巴；接种后一周左右可以见到皮下开始出现肿块。

5、皮下肿瘤大小

根据肿瘤细胞的特性和接种细胞的量，一般皮下成瘤的周期为1-2个月。肿瘤不宜生长过大，一般不要超过1000mm3。肿瘤大小测量一般为1周两次，游标卡尺测量肿瘤最长和最短部位。V=1/2ab2(a为长轴，b为短轴)。

6、皮下肿瘤保存

皮下瘤取下后一部分冻液氮用作以后提蛋白和RNA，一部分福尔马林固定用做免疫组化、免疫荧光等。