细胞技术

细胞焦亡的研究方法与检测方式

2025-02-11 细胞技术加入收藏

首先是细胞焦亡的特点：细胞焦亡发生时，细胞会发生肿胀，在细胞破裂之前，细胞上形成凸出物(图1，早期细胞焦亡)，之后细胞膜上形成孔隙，使细胞膜失去完整性，释放内容

首先是细胞焦亡的特点：

细胞焦亡发生时，细胞会发生肿胀，在细胞破裂之前，细胞上形成凸出物(图1，早期细胞焦亡)，之后细胞膜上形成孔隙，使细胞膜失去完整性，释放内容物，引起炎症反应，此时，细胞核位干细胞中央(图1，晚期细胞焦亡)，随着形态学的改变，细胞核固缩，DNA断裂。

细胞焦亡过程，具有caspase-1依赖性。在外界条件的刺激下，caspase-1前体可以与模式识别受体NLRP1、NLRP3等通过接头蛋白ASC变为一个高分子复合物，即炎症小体，也称依赖caspase-1的炎症小体。细胞在caspase-1激活同时会释放出炎性因子白细胞介素-1β(interleukin-1βIL-1)和IL-18，进而吸引更多的炎性细胞，加重炎症反应。焦亡发生时形成子隙，它允许细胞质的内容物，如乳酸脱气酶(lactate dehvdrogenase，LDH)和炎性细胞因子释放，荧光标记的膜朕蛋白V，7-氨基放线菌D或碘化丙啶进入细胞。

其次是细胞焦亡的信号通路：

细胞焦亡属于炎症性死亡途径，按激活机制，可分为Caspase-1依赖和不依赖两种途径。两种途径都是通过切割GSDMD后形成N端游离的肽殷，这一肽殷会诱导细胞形成孔道并导致细胞破裂，释放胞质成分。两种途径都能同时诱导IL-1B和IL-18的前体进行切割，形成成熟的IL-1和IL-18。不同的只是是否直接激活Caspase-1。

然后就是我们本文的重点，细胞焦亡的研究方法：

细胞焦亡的机制中GSDMD的切割，IL-1B和IL-18前体的切割成熟和释放是关键信号，因此证明所诱发的细胞死亡方式是否为细胞焦亡，需要几个关键的实验证据:

(1)GSDMD的切割(Western检测);

(2)Caspase的激活，主要是Caspase-1，Caspase-4，Caspase-5，Caspase-11。(Western检测);

(3)IL-1β和IL-18前体的切割成熟和释放(Western，ELISA等);

(4)细胞形态学检测(CCK-8等);

(5)染色质完整性检测(Tunel等)。

而细胞焦亡完整检测方式如下:

1、形态变化

(1)扫描电镜观察细胞形态;

(2)免疫荧光染色(GSDMD/GSDME);

(3)Tunel检测;