正常大鼠唾液腺上皮细胞的培养

实验材料：

1. 新生大鼠唾液腺；

2. 不含Ca2+ 和Mg2+ 的1×PBS，添加200000IU/L青霉素、200mg/L链霉素，pH7.2；

3. 培养用液：DMEM培养液，添加10%的胎牛血清、5μg/ml胰岛素、10 ng/ml表皮生长因子、50 ng/ml氢化可的松、100 IU/ml青霉素和100μg/ml链霉素。无Ca2+ 、Mg2+ 的D-Hanks液，使用时添加100 IU/ml青霉素和100μg/ml链霉素；

4. 鼠尾胶原液：先吸取4ml鼠尾胶原溶液放入冰浴中的青霉素小瓶，加入0.5ml的10×DMEM培养基。混匀后，再加入浓度为0.34 mol/L的NaOH 0.1ml快速混合（鼠尾胶原液的配制比例，按鼠尾胶原液与10×DMEM及0.34 mol/L NaOH三者的体积比为8:1:1配制），并立即加到24孔培养板中（每孔0.8ml），于37℃下放置30min；

5. 将配好的鼠尾胶原溶液涂布在预先灭菌处理过的盖玻片上，使其凝固；

6. 将鼠尾胶原包被的盖玻片放入24孔培养板内，用D-Hanks液平衡1h，备用；

实验方法：

1. 在无菌条件下取出新生大鼠（10g）的腮腺或颌下腺组织，仔细分离腺体周围的结缔组织，用无Ca2+ 、Mg2+ 的D-Hanks液将腺组织冲洗干净；

2. 将腺体组织剪成1—2mm3大小的植块，洗净植块上的血液和粘液；

3. 按一定密度（即植块与植块之间相距2mm左右），将植块种植到包被有鼠尾胶原的盖玻片上；

4. 加入DMEM培养液。每周换液1次；

5. 细胞长满后，在细胞传代的过程中去除植块。