姐妹染色单体分化染色方法

姐妹染色单体差别染色可使中期染色体显示深浅不同的两条单体，能借以观察姐妹染色单体互换（SCE）现象。SCE是两条染色单体在DNA合成中核苷酸序列发生互换而表现出来一种现象。即是细胞分裂是DNA同源重组的结果。SCE既是一种无害的变化（有生理波动），也可受射线、致突和致癌物三因素等作用而升高。SCE一定成度反映细胞的损伤与修复状态。   1.  原理：   在细胞培养过程中，加入一定是的5-溴脱氧尿苷（BudR ）,当细胞在DNA复制过程时，BudR能作为核苷酸的前体取代胸腺嘧啶而被掺入到新合DNA中。因此，当细胞处于第二个分裂周期时，同一染色体的两条姐妹染色单体，一条由双股都含有BudR的DNA链构成，而另一条为单股含有BudR的DNA链。在结构上双股含BudR的DNA螺旋化程度较低，故对染色剂亲合力低，在用Giemsa染色时其单体着色浅，只有单股含BudR的DNA链组成的单体则着色深而形成差别着色。   2.  BudR贮存液的配制：   BudR 5 mg（先用0.5 ml 1 N NaOH溶解）   然后加蒸馏水至 5 ml   即成1000 ug/ml的贮存液，因BudR遇光会发生分解，贮存液需置棕色瓶并黑纸封瓶避光冰冻保存。   3.  实验材料：   所检培养细胞；   BudR贮存液；   2×SSC液；   常规染色体制片所需物品；   水浴锅；   20W紫外灯一个；   培养皿；   镜头纸；   4.  操作程序   （1）BudR掺入：细胞培养24小时后于培养液中加入BudR，最终浓度5-15 mg/ml，避光条件下继续培养。   （2）终止培养：待细胞经历两个细胞周期（48小时），培养终止前3小时加秋水仙素，秋水仙素终浓度为0.02 ug/ml培养液；   （3）常规制片及烤片；   （4）紫外灯照射：取标本玻片置于大号培养皿内，正面朝上，上覆盖镜头纸，从玻片外镜头纸边沿加2×SSC液致使全镜头纸浸湿，移入50-60 ℃水浴锅内，紫外线灯距离5 cm，照射30-40分钟；   （5）染色：取出照射后标本，蒸馏水冲洗，置PH6.8的2%Giemsa染色15分钟；   （6）洗片及存片：同G带片   注意：BudR是一种强突变剂，使用浓度不宜过高，否则会产生细胞毒性作用。