细胞生物基本方法：肿瘤细胞培养

肿瘤细胞培养

特殊之处在于成纤维细胞的排除（成纤维细胞常与肿瘤细胞同时混杂生长，致难以纯化肿瘤组织）。有以下一些方法：

1． 机械刮除法

2． 反复帖壁法

3． 消化排除法

4． 胶原酶消化法

1） 机械刮除法

1． 标记：镜下观察，用不脱色笔在培养瓶皿的背面圈下生长肿瘤细胞的部位。

2． 刮除：弃掉培养液，把无菌胶刮伸入瓶皿中，肉眼或显微镜窥视下，刮除无标记空间。

3． 用 Hanks 液冲洗一两次，洗除被刮掉的细胞。

4． 注入培养液继续培养，如发现仍有成纤维细胞残留，可重复刮除至完全除掉为止。

2） 反复帖壁法

1． 待细胞生长达一定数量后，倒出旧培养液，用胰酶消化后， Hanks 冲洗 2 次，加入不含血清的培养液，吹打制成细胞悬液。

2． 取编号为 A 、 B 、 C 三个培养瓶。首先把悬液接种入 A 培养瓶中，置温箱中静止培养 5 ～ 20 分钟后，轻轻倾斜培养瓶，让液体集中瓶角后慢慢吸出全部培养液，再接种入 B 培养瓶中后，向 A 瓶中补充少许完全培养液置温箱中继续培养。

3． 培养 B 瓶中细胞 5 ～ 20 分钟后，按处理 A 的方法，把培养液注入 C 培养瓶中，再向 B 瓶补加完全培养基。

3 ）消化排除法

1． 先是用 0.5 ％胰蛋白酶和 0.02 ％ EDTA （ 1 ： 1 ）混合液漂洗培养基细胞一次，然后再换成新的混合继续消化，并在倒置显微镜下窥视和不时摇动培养瓶，到半数细胞脱落下来后，便立即停止消化。

2． 把消化液吸入离心管中，离心去上清，吸入另瓶中，加培养液置温箱中培养，向原瓶内也补加新的培养液继续培养。用此法处理后，成纤维细胞比肿瘤细胞易先脱落，经过几次反复处理，可能把成纤维细胞除净。

4 ）胶原酶消化法

1． 可用 0.5mg/ml 的胶原酶消化处理，边消化边在倒置显微镜下窥视，当发现成纤维细胞被除掉后，即终止消化。

2． 用 Hanks 洗涤处理一次后，更换新培养液，继续培养，可获纯净肿瘤细胞。如成纤维细胞未被除净，可再次重复。