正常大鼠巨噬细胞的培养

实验材料：

1. 成年大鼠或小鼠，采用腹腔取材法

2. 不含Ca2+和Mg2+ 的1×PBS，添加200000IU/L青霉素、200mg/L链霉素，pH7.2

3. 培养基：RPMI1640、Ham`s F12等均适于巨噬细胞的培养。大多数巨噬细胞的培养可加10%-40%的血清，小鼠巨噬细胞加10%小牛血清，用无血清培养基亦可。新生小牛血清中含有抗体，能刺激巨噬细胞成熟，也可用乳清蛋白培养

4. 动物解剖台或蜡板1个，带钩眼科镊子2支，解剖剪1个，10ml注射器1个，针头数支，离心管2支，吸管数支，培养瓶数个，血细胞计数器1个，Eagle液，肝素（10U/ml）30ml，Eagle培养液（含10%小牛血清和青霉素、链霉素）50ml

实验方法：

1. 实验前3d，向每只小鼠腹腔内注入无菌硫羟乙酸肉汤1ml；

2. 引颈杀死动物，手提鼠尾将全鼠浸入70%乙醇中3-5s。置动物于解剖台上，用针头固定四肢，双手持镊撕开皮肤拉向两侧，暴露出腹膜，但勿伤及腹膜壁；

3. 再用70%乙醇擦洗腹膜壁后，用注射器吸10ml Eagle液注入腹腔中，同时从两侧用手揉压腹膜壁，令液体在腹腔内充分流动；

4. 用针头轻轻挑起腹壁，使动物体微倾向一侧，使腹壁中液体集中于针头下吸取入针管内。小心拔出针头，把液体注入离心管中，1000r/min，离心10min后，去上清，加10ml Eagle培养基；

5. 计数细胞，每只小鼠可产生2×107 —3×107 个细胞，其中90%以上为巨噬细胞。为纯化培养细胞，去除其他白细胞，接种数小时后，去除培养液，用Eagle液冲洗1—2次后，除去漂浮的细胞，得到贴壁的巨噬细胞。再加新Eagle培养液置37℃、5%CO2 温箱中培养。