检测DNA分析细胞周期

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Ⅰ、样品准备

准备以下一种或几种样品

A、组织单细胞悬浮液(如淋巴腺、脾、骨髓、胎盘细胞)

B、组织培养细胞

C、Ficoll-hypaque分离的单核细胞

Ⅱ、反应体系-DNA低渗缓冲液

柠檬酸三钠 　 　　0.25g Triton-X 100 0.75ml Propidium iodide 0.025g

核糖核酸酶 　　　　 　0.005g

蒸馏水　　　　　　　　250ml

我们将该DNA低渗溶液于密闭瓶子中存放数月后并无发现有任何染色活性的丢失

Ⅲ、染色

1、 每一个管子中放入1×106个细胞;

2、 样品离心后尽可能完全地移去上清液，并且不要打碎沉淀块;

3、 入1ml的DNA低渗染色缓冲液至沉淀中，并混匀;

4、 样品于4℃下避光30分钟或最长不超过1个小时以备流式细胞仪 分析。

注意：延长在低渗缓冲液的曝光时间会引起样品碎片的增加。