大豆β-伴球蛋白(β-conglycinin)酶联免疫分析（ELISA）

大豆β- 伴球蛋白( β-conglycinin) 酶联免疫分析（ ELISA ）

试剂盒使用说明书

本试剂仅供研究使用         目的：本试剂盒用于测定植物组织，细胞及其它相关样本中β- 伴球蛋白( β-conglycinin) 含量。

实验原理：

    本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中大豆β - 伴球蛋白 ( β -conglycinin) 水平。用纯化的大豆β - 伴球蛋白 ( β -conglycinin) 抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入β - 伴球蛋白 ( β -conglycinin) ，再与 HRP 标记的β - 伴球蛋白 ( β -conglycinin) 抗体结合，形成抗体 - 抗原 - 酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物 TMB 显色。 TMB 在 HRP 酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的β - 伴球蛋白 ( β -conglycinin) 呈正相关。用酶标仪在 450nm 波长下测定吸光度（ OD 值），通过标准曲线计算样品中大豆β - 伴球蛋白 ( β -conglycinin) 浓度。

试剂盒组成 ：

标本要求：

1 ．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可 将标本放于 -20 ℃ 保存，但 应避免反复冻融

2．不能检测含NaN3的样品 ，因 NaN3 抑制辣根过氧化物酶的（ HRP ）活性。

操作步骤：

1.         标准品的稀释与加样：在酶标包被板上设标准品孔 10 孔，在第一、第二孔中分别加标准品 100μl ，然后在第一、第二孔中加标准品稀释液 50μl ，混匀；然后从第一孔、第二孔中各取 100μl 分别加到第三孔和第四孔，再在第三、第四孔分别加标准品稀释液 50μl ，混匀；然后在第三孔和第四孔中先各取 50μl 弃掉，再各取 50μl 分别加到第五、第六孔中，再在第五、第六孔中分别加标准品稀释液 50ul ，混匀；混匀后从第五、第六孔中各取 50μl 分别加到第七、第八孔中，再在第七、第八孔中分别加标准品稀释液 50μl ，混匀后从第七、第八孔中分别取 50μl 加到第九、第十孔中，再在第九第十孔分别加标准品稀释液 50μl ，混匀后从第九第十孔中各取 50μl 弃掉。（稀释后各孔加样量都为 50μl ，浓度分别为 240n g/L ， 160n g/L ， 80n g/L ， 40n g/L ， 20n g/L ）。

2.         加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、 待测样品孔。在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液 40 μ l ，然后再加待测样品 10 μ l （样品最终稀释度为 5 倍）。 加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。

3.         温育：用封板膜封板后置 37 ℃ 温育3 0 分钟。

4.         配液：将 30 （ 48T 的 20 倍）倍浓缩洗涤液用蒸馏水 30 （ 48T 的 20 倍）倍稀释后备用。

5.         洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置 30 秒后弃去，如此重复 5 次，拍干。

6.         加酶：每孔加入酶标试剂 50μl ，空白孔除外。

7.         温育：操作同 3 。

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