酵母遗传学方法12：酵母菌落PCR方法

酵母菌落 PCR 方法

1． 在冰上配制反应混合液：

2 μ l                   10 ×菌落 PCR 缓冲液

1.2 μ l                 25mmol/L MgCl2

0.4 μ l                 10mmol/L dNTPs

10pmol                引物（每一种引物）

0.2 μ l                 Taq DNA 聚合酶（ 5U ）

加水到总体积为 20 μ l

2． 用移液器加微量细胞（约 0.25 μ l ）到 PCR 反应混合液中（ 20 μ l 反应体积）

3． PCR 循环参数：

94 ℃           4 分钟

94 ℃           1 分钟

55 ℃            1 分钟

72 ℃           2 分钟

35 个循环

72 ℃           10 分钟

4． 上全部样品进行琼脂糖电泳。