Login
欢迎浏览恩派尔生物资料网
我要投稿 请登录 免费注册 安全退出

您现在的位置是: 首页 > 实验方法 > 细胞技术

细胞技术

细胞生物基本方法:微生物污染的排除

2025-03-04 细胞技术 加入收藏
微生物污染的排除 细胞受各种霉菌、细菌和支原体污染后,一般都较难排除或杀灭,其中以支原体更难排除,因此从预防着眼为上。 1) 抗生素除菌法:用 BM - 1

微生物污染的排除

 

细胞受各种霉菌、细菌和支原体污染后,一般都较难排除或杀灭,其中以支原体更难排除,因此从预防着眼为上。

 

 

1)  抗生素除菌法:用 BM - 1 (截耳素衍生物)和 BM - 2 (四环素衍生物)抑制支原体

1. 抗生素制备:均可用 PBS 配成 250 ×浓缩液- 20 ℃备用,使用浓度参考《组织培养和分子细胞学技术》 117 页表 6 - 2 。

2. 处理:取受支原体污染的细胞,吸除培养液,加入含 BM-1 的 1640 培养液培养 3 天后,吸除培养液,再加入含 BM-2 的 1640 培养液培养 4 天,如此连续三个轮回。

3. 检测:用 33258 荧光染色镜检(每个轮回末应检测一次)。

4. 培养:清除支原体后的细胞,在不加上述抗生素的培养液中,再传代培养 3 ~ 4 次。

5. 镜检:如清除不彻底可再进行处理至纯净为止(一般 3 个轮回即能被完全消除)。 BM-1 和 BM-2 与 CIP ( 4- 氟, 2- 羟基喹啉)联合应用亦可,即先用含 BIP 培养液培养 12 天后,再按上述方法处理。

 

 

2)  加温除菌法

把受污染的细胞置 41 ℃中作用 5 ~ 10 小时。

 

 

3)  动物体内接种除菌法

把受支原体污染的肿瘤细胞接种在同种动物皮下或腹腔中,借动物免疫系统消灭支原体,而肿瘤细胞却能在体内继续生长,待一定时间后,从体内取出细胞再进行培养繁殖。

 

 

4)  巨噬细胞吞噬法

从动物腹腔采取巨噬细胞,为排除其它细胞成分,可先进行纯化,然后再加入被支原体污染的细胞培养液中混合培养。在培养过程中,为检查支原体是否已被消除干净,可利用支持物培养法验证,取出支持物逐日染色、镜检观察,至支原体已被消除干净为止。


文章底部广告位

文章评论

加载中~