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细胞技术

BrdU标记法-细胞增殖的检验方法

2025-03-07 细胞技术 加入收藏
1.细胞以1.5105/ml细胞数接种于直径35ml培养皿中(内放置一盖玻片),培养1天,用含0.4% FCS培养液同步化3天,使绝大多数细胞处于G0期。 2.

1.细胞以1.5×105/ml细胞数接种于直径35ml培养皿中(内放置一盖玻片),培养1天,用含0.4% FCS培养液同步化3天,使绝大多数细胞处于G0期。 2.终止 细胞培养 前,加入BrdU(终浓度为30μg/L),37℃,孵育40min。 3.弃培养液,玻片用PBS洗涤3次。 4.甲醇/醋酸固定10min。 5.经固定的玻片空气干燥,0.3%H2O2-甲醇30min灭活内源性 氧化酶 。 6.5%正常兔 血清 封闭。 7.甲酰胺100℃,5min变性核酸。 8.冰浴冷却后PBS洗涤,加1抗即抗小鼠BrdU单抗(工作浓度1:50),阴性对照加PBS或 血清 。 9.按ABC法进行检测,苏木素或伊红衬染,在显微镜下随机计数10个高倍视野中细胞总数及BrdU阳性细胞数,计算标记指数(LI)。

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