细胞表面抗原染色的组织样本制备方法
该方法适用于新鲜和冷冻标本 1.将组织(10-20mm)切成1-2mm的碎片,用缓冲液或培养液浸湿。 2.用1ml缓冲液或培养液预洗Medicon 二遍。 3.将组织和1ml缓冲液或培养液放入到Medicon中,盖上盖子,将Medicon 插入到Medimachine中。 4.降解组织。降解组织的时间长短依赖于组织类型。(参见降解时间表)。 5.用注射器通过 Medicon上的注射器接口将上清吸去。 6.用1ml缓冲液或培养液冲洗Medicon三遍。 7.选择适当大小孔径的Filcon 滤器过滤细胞悬液。(50-mmFilcon 适用 于大 多数组织,如:淋巴结、肿瘤组织、皮肤组织) 8.用1ml缓冲液或培养液冲洗Filcon三遍。 9.250g离心细胞悬液5分钟。 10.用适当的缓冲液或培养液重悬细胞沉淀。 11.若需要,重复3-10步骤。 12.调节细胞浓度至5×105-1×106/ml。 13.用适当浓度的抗体在2-80C与100ml细胞悬液孵育15-30分钟。 14.加2ml 冷的缓冲液或培养液(2-80C), 250g离心5分钟。 15.用缓冲液或培养液重悬细胞沉淀。 16.分析样本。 注意: 1.在处理和接触有感染危险性 生物 样本时,应根据相关法规处理 废液。避免皮肤或粘膜接触样本。勿用嘴移液。 2.该方法虽经验证,但客户需根据自己实验室条件及所处理的组织 类型进行适当调整。 降解时间表:
组织 | 数量(3-6mm3小块) | 脉冲 | 时间 | 条件 |
乳腺组织 | 3-6 | 2次 | 30秒 | 新鲜或冷冻 |
膀胱 | 4-5 | 2次 | 20秒 | 新鲜或冷冻 |
结肠 | 3-6 | 2次 | 20秒 | 新鲜或冷冻 |
胃 | 4-6 | 2次 | 20秒 | 新鲜或冷冻 |
胃肿瘤边缘组织 | 3-6 | 2次 | 20秒 | 新鲜或冷冻 |
健康组织、胃肿瘤 | 3-4 | 2次 | 20秒 | 新鲜或冷冻 |
淋巴结 | 3-6 | 2次 | 15秒 | 新鲜或冷冻 |
脾脏 | 3-6 | 2次 | 15秒 | 新鲜或冷冻 |
肝脏 | 3-6 | 2次 | 15秒 | 新鲜或冷冻 |
卵巢 | 3-6 | 2次 | 30秒 | 新鲜或冷冻 |
前列腺 | 2-3 | 2次 | 35秒 | 新鲜或冷冻 |
脑组织 | 3-6 | 1次 | 10秒 | 新鲜或冷冻 |
肺组织 | 2-3 | 2次 | 30秒 | 新鲜或冷冻 |
子宫 | 3-6 | 1次 | 60秒 | 新鲜或冷冻 |
皮肤 | 3-4 | 1次 | 45秒 | 新鲜或冷冻 |
注意: 该方法虽经验证,但客户需根据自己实验室条件及所处理的组织 类型进行适当调整。