人或动物肺毛细血管原代内皮细胞的分离

  实验材料：       1.  人或动物的肺部毛细血管       2.  PBS，含青霉素100U/ml和链霉素100μg/ml       3.  3mg/ml中性蛋白酶、0.25%胰蛋白酶       4.  眼科剪，眼科镊       5.  20μm尼龙筛、100μm尼龙筛       6.  离心管（15ml、50ml）         实验方法：       1.   将动物麻醉后开胸取肺组织，将肺组织切成1cm3 的小块，用PBS冲洗干净。剪去胸膜，剔除大血管。       2.  用匀浆机制备肺组织匀浆，然后放在20μm尼龙筛上冲洗，以去掉红细胞和组织碎片。       3.  消化肺组织：将留在筛子上的组织悬浮于3mg/ml中性蛋白酶的培养液中，在37℃恒温振荡器中孵育16h。将消化液装入离心管中离心（2000r/min，10min），沉淀物悬浮于含1mmol/L EDTA的0.25%胰蛋白酶液中，37℃孵育15min。       4.  加入完全培养液终止胰蛋白酶消化，通过100μm尼龙筛，以去除结缔组织碎片。将滤过液以2000r/min离心10min，并悬浮于培养液中，可进行细胞培养。