丁香园网友细胞培养的经验

1、认真按照操作规程进行实验，一般不大会导致污染，很多情况下是由于所用的试剂或培养基有污染而使实验失败，

2、粉末培养基配制好后 ( 加了血清 ) ，一般在 4 度尽量不要超过 1 个月，如在 -20 度 存放时间 可长一些，但最好也不要超过 3-4 个月，可能对于永生化细胞株来说要求不是太高，但我在过去的 4 年里一直是作原代细胞培养的，细胞娇弱，经验表明放置时间不宜过长。

3、关于实验用品的清洗与消毒，我的经验是：用过的玻璃器皿先在清水中浸泡 30min 以上，然后加少许清洗剂，以超声波洗涤 30min 左右， ( 如无超声波洗涤器可用软毛刷轻轻刷洗干净 ) ，捞出晾干，再在铬酸洗液中浸泡 6-18h( 或过夜 ) 后，自来水清洗 10-15 遍，双蒸水清洗 3-4 遍，晾干，高压消毒后即可使用。

许多塑料制品也可以高压消毒，例如培养瓶盖，胶塞，吸头等。不能用于高压的一般均已制成一次性作用的商品了，当然如果 money 有限，如进口的培养板、皿等，也可以重复使用 1-2 次，我当时使用方法是将其完全清洁后，使用前在紫外灯下敞开照射 1-1.5h 即可，我做过多次，没有出现问题。塑料培养瓶由于清洗消毒不便，最好不要重复使用，如一定要重复用，可用环氧乙烷等消毒， ( 消毒后一定要放置半年以上方可使用 )

在光镜下，上皮细胞通常呈 “ 铺路石 ” 样排布，细胞之间有拉丝现象（即距离较远的细胞可以通过细长的触手相连），细胞有成片生长的特性。而间质细胞通常呈梭形，没有有成片生长的特性，细胞之间的联系不紧密。但是细胞的形态特征会因为生长条件的改变而改变，如 HeLa 细胞是上皮细胞，但是在酸性培养条件下会变为梭形。

上皮细胞之间都有特征性的紧密连接（桥粒）结构，因此可以通过观察培养细胞的超微结构来判断细胞的类型，如果有紧密连接，就必然是上皮细胞。这是一锤定音的证据。注意不要把细胞消化下来做电镜，要用细胞刮刮下来后做电镜。

此外每一种上皮细胞都有其特征的细胞角蛋白的表达（ cytokertin, CK ） , 可以查一下子宫内膜腺上皮细胞表达的 CK 分子，然后进行免疫细胞化学的鉴定。

细胞在偏碱的情况下培养，耐受能力会逐渐下降，可能是产生脱壁现象的原因，后来我重新测了一下培养基，为 7.5 左右，我用灭菌的 HCL 调了一下，培养基颜色变成淡红透亮，再次培养，发现细胞贴壁比较好了，搏动效果也不错，因此，我以后每次培养前都要重新调好 PH 值，我觉得很多因素是能影响 PH 值的。

血清质量不好，影响了细胞生长。所以，我认为以后养细胞，用的血清浓度最好是每批次血清都摸一下，不一定要以参考文献为准，毕竟国产的血清质量差异比较大啊。

细胞无菌操作是关键，对于配制培养液时，有些人为了让培养粉充分溶解，搅拌 4 小时或更长时间。其实这完全没有必要，一般培养基的固体组分还是易溶于水的，搅拌的时间长了会增加污染机会，虽然后来滤过除菌了，但细菌的代谢产物比如脂多糖谁能够把它滤掉？细菌的代谢是很快的，甚至在常温下 20min 就可以繁殖一代，太可怕了。我的经验就是搅拌 30min-60min 就把它过滤。