FITC标记抗体-改良法

 试剂：      1. 0.01mol/L pH7.2 PBS配方。将NaCl 18g、Na2HPO4 1.15g、KH2PO4 0.2g 溶于2000ml三蒸水中，调整pH至7.2；      2. 0.5mol/L pH9.0碳酸盐缓冲液配法。量取0.5mol/L Na2CO3(5.3%)10ml 加入0.5mol/L NaHCO3(4.2%)90ml中，充分混合后，调整pH至9.0；      3. 3%中碳酸钠水溶液的配制。称取1.5g无水正碳酸钠充分溶解于50ml三蒸水中即成；      方法与步骤：      根据Marshall氏法高效价的抗人球蛋白兔免疫血清，分离球蛋白。      1. 用0.15 mol/L NaCl的盐水及0.15 mol/L pH9.0的NaHCO3-Na2CO3缓冲液稀释使每毫升内含抗体10mg，缓冲液为总量的10%；      2. 将以上溶液降温至4℃，按蛋白：荧光素=50—80mg：1mg的比例加入异硫氰酸荧光素，在0—4℃下电磁搅拌12—14h；      3.用半饱和硫酸铵将标记球蛋白沉淀分离，除去未结合的荧光素，再用缓冲盐水透析，除去硫酸铵，最后用Nessler氏试剂测验至隔夜透析之盐水无氨离子及荧光色素为止；      4.将制备好的荧光抗体加0.01%的叠氮钠，分装在1ml安培中，或冻干，或保存于4℃冰箱中可以用半年以上，也可于-20℃冰箱保存达2年以上。