细胞骨架的光学显微镜观察

一、实验目的 　　掌握植物细胞骨架的光镜标本制作方法。 　　细胞骨架是指细胞质中纵横交错的纤维网络结构，按组成成分和形态结构的不同可分为微管、微丝和中间纤维。它们对细胞形态的维持、细胞的生长、运动、分裂、分化和物质运输等起重要作用。光学显微镜下细胞骨架的形态学观察多用1% Triton X-100处理细胞，可使细胞膜溶解，而细胞骨架系统的蛋白质被保存， 再用考马斯亮兰R250染色，使得胞质中细胞骨架得以清晰显现。 二、材料、试剂和 仪器 　　1． 材料 　　　　新鲜洋葱鳞茎、人口腔上皮细胞 　　2． 试剂 　　　　1） M缓冲液（pH 7.2）各成分终浓度为： 　　　　　　50mmol/L咪唑(MW:68.08), 　　　　　　50mmol/L KCl(MW:74.55), 　　　　　　0.5mmol/L MgCl2?6H2O(MW:203.30), 　　　　　　1mmol/L EGTA(MW:380.36), 　　　　　　0.1mmol/L EDTA-Na2(MW:372.24), 　　　　　　1mmol/L DTT(MW:154.3) 　　　　2） 6mmol/L PBS磷酸缓冲液 （pH 6.5）: 　　　　　　KH2PO4 : Na2HPO4?2H2O = 7:3 (见附录3 查磷酸缓冲液的配置) 　　　　3） 0.7% NaCl生理盐水 　　　　4） 1% Triton X-100(聚乙二醇辛基苯基醚) 溶于 M-缓冲液 　　　　5） 3% 戊二醛100mL: 25% 戊二醛取12mL ,PBS 88mL 　　　　6） 0.2% 考马斯亮蓝R250染液 200mL: 　　　　　　考马斯亮蓝R250 0.2g, 　　　　　　甲醇 46.5mL, 　　　　　　冰乙酸 7mL, 　　　　　　蒸馏水46.5 mL 　　3． 仪器 　　　 光学显微镜，镊子，剪刀，试管，表面皿，滴管，载玻片，盖玻片,灭菌牙签，1.5mL 离心管 ，1mL 吸头 ，1mL取液器，酒精灯，染色缸

细胞骨架动画

三、实验程序 　　 四、结果与分析 　　洋葱鳞茎外层与内层的表皮细胞比较（放大倍数10×20） 　　 五、思考题 　　1．光镜下观察到的细胞骨架有何形态特征？ 　　2．请设计一个实验鉴定你所观察到的细胞骨架是哪一类型。