非特异性酯酶组织化学染色法

非特异性酯酶组织化学染色法 羧酸酯水解酶或称酯酶(esterase)，是一类水解酯的酶，其作用是水解脂肪族酯和芳香族酯，催化反应式如下： 一般所指的脂酶是非特异性酯酶，无底物特异性。广义的酯酶包括特异性酯酶，有底物特异性。各种酯酶水解的底物和最适pH不尽相同。 非特异性酯酶主要定位于内质网和溶酶体，也可少量存在于线粒体和胞液内。它主要参与酯类代谢，也与蛋白质代谢有关。非特异性酯酶在胰腺外分泌部腺细胞、横纹肌运动终板及小肠上皮细胞呈强阳性反应；在肝细胞 、肾近端小管上皮细胞及结肠上皮细胞呈阳性反应。常用偶氮色素法显示非特异性酯酶活性，其原理如下：在酶的作用下，底物分解游离出来。―萘酚，后者与重氮盐偶联形成偶氮色素，同时沉着于酶存在部位，通过偶氮色素的显色，间接证明酶存在部位。α―萘酚系统的物质可用重氮盐中坚牢蓝B、监牢蓝RR、监牢红RC盐，而萘酚AS系统的物质则用石榴石、可林思LB盐、固蓝B、固红RC、固红紫LC等。反应式如偶氮色素法显示非特异性酯酶反应原理 (1)孵育液配制 α―醋酸萘酚 10mg 丙酮 0．25ml 0．1mol/L PBS(pH 7．4) 20ml 固蓝B盐 30rug 先将α―醋酸萘酚与丙酮混合并完全溶解后加入PBS，充分搅拌至液体清亮后加入固蓝B盐，搅拌后过滤，立即使用。 (2)染色程序：①冰冻切片人孵育液中，室温10―60分钟或37℃10～1；分钟；②蒸馏水洗；③4％甲醛室温固定10分钟；④自来水冲洗，蒸馏水浸洗；⑤甘油明胶封固。(3)结果：酶活性处呈砖红色，如用固红TR则为紫红色，用固红RC为暗红色，用固蓝RR则为青铜色。非特异性酯酶醋酸萘酚同时似暇法染色：大鼠肾皮质呈砖红色为非特异性酯酶阳性反应(4)对照实验：去底物反应结果为阴性。