小鼠单核巨噬细胞RAW264.7的消化及传代

RAW264.7因是单核巨噬细胞其生物学特性就是贴壁特别牢，普通的方法根本就不可能将它消化下来，这也是养这种细胞最头痛的问题。现将我的一点心得，简介如下：

消化液：0.5％胰酶、0.2％EDTA，实验前加温到37度

以50ml培养瓶为例：

1、细胞贴壁生长，长满瓶底80％时，弃去培养液，加D-HANKS 漂洗 两次；

2、 加入含胰酶和EDTA的消化液1－2ml,消化37℃约2-5min，镜下可见细胞基本圆形回缩即中止消化，弃消化液加D-HANKS 漂洗两次；

3、加入新培养液10ml复吹打混悬细胞，按需要分入 新的培养瓶；

4 、入37℃5％CO2孵箱，几小时后即可再贴壁 。