酸性磷酸酶重氮盐后偶联法

酸性磷酸酶重氮盐后偶联法：     与碱性磷酸酶相同。重氮化和偶联反应多在碱性溶液中和低温条件下进行。在酸性溶液中容易分解。所以酶作用与偶联反应分两步进行。     1)孵育液配制    磷酸―6―苯酰-2-萘钠         25rug    蒸馏水                       80ml    Wapoll醋酸缓冲液(pH 5．0)    20ml    氯化钠                       2g    重氮盐溶液配制：    坚牢蓝B盐                   50rug    蒸馏水                       50ml    加碳酸氢钠使之碱化。     2)染色程序：    ①用新鲜或冷福尔马林固定的组织进行恒冷箱切片：    ②切片人孵育液中，室温孵育10―60分钟(新鲜组织切片)，或1～2小时(固定后组织切片)；    ③新鲜组织切片用冷生理盐水洗3次，固定后的组织切片用蒸馏水洗3次；    ④放人新鲜配制的冷重氮液中，搅动3～5分钟；    ⑤用冷生理盐水或蒸馏水洗3次，每次5分钟；    ⑥甘油明胶封固。     3)结果：酶活性部位显示蓝色。     4)对照实验：与铅法相同。